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踏雪无痕love金虫 (正式写手)
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[求助]
引物合成回来后，前后引物的Tm值相差将近9度，问PCR时退火温度该如何设定？ 已有4人参与
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| 如题，在此请教各位虫友，遇到这种情况该怎么办？ |
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hcf321283
木虫 (小有名气)
- 应助: 27 (小学生)
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- 散金: 10
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- 虫号: 3470801
- 注册: 2014-10-12
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2015-10-27 09:35:15
seo.d_park
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 6488.3
- 散金: 3
- 红花: 2
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- 在线: 60.9小时
- 虫号: 2612814
- 注册: 2013-08-23
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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建议你 用gradient 方法 测试 一下 引物 退火温度， 比如A 是56度 B是 65度 ，取4-6个温度点（56，58，60，62，64） ，cycle 首先 试试30周期， 如果某个温度点能有条带能观察到，再降低 周期数。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2015-10-27 08:16:00
感谢参与，应助指数 +1
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本帖内容被屏蔽 |
3楼2015-10-27 08:16:26
199006287956
木虫 (著名写手)
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- 虫号: 2344563
- 注册: 2013-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
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没有严格的规定说相差9度就不能跑出条带，最好是相差不多，退火温度50-65都可以，48度也行，48度以下的退火温度没有用过，本人习惯52-60度左右。本站有资料，下载自己看一下，设计引物稍微注意一下设计原则基本无碍。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-10-27 08:16:38
