24小时热门版块排行榜    

查看: 1609  |  回复: 7

Bio-Way

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平,特别是可溶性表达?

如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平,特别是可溶性表达?
求交流
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提高表达量,要么在克隆上优化,要么在诱导表达上优化,后者更多一些,诱导时间,诱导温度,诱导剂加入时间,诱导剂终浓度这些都要优化。
2楼2015-10-26 08:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这问题问的。。。
这个问题是最困扰做蛋白表达与纯化的人的。具体事例具体分析,比如大肠杆菌表达蛋白本身表达量就大,但是表达的大都是包涵体,想要获得可溶性蛋白,就需要做复性,或是再设计实验时就想办法让其在上清中表达。一般就要通过基因优化,载体宿主优化筛选,表达条件优化,诱导条件优化等等。
这里有篇比较适合这个问题的文章,你可以看看:原核蛋白可溶性表达策略及实验方案
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
3楼2015-10-26 09:32:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2015-10-26 22:46:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyang12039

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
前期构建个表达重组质粒,后面对诱导条件进行优化
5楼2015-10-27 12:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
何不做真核真核蛋白表达可以一试 原核的话基因优化是重点
6楼2015-10-27 13:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

加可溶性Tag,如GST、SUMO;以及降低诱导温度,可低至28度。
7楼2015-10-29 00:11:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

古月问你哦

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可溶性优化挺复杂的,除了基因优化外,还要考虑到宿主感受态细胞比如分子伴侣等,诱导表达时注意要低温,IPTG的含量,培养基的营养,诱导后的时间,可通过排列组合的方式得出最佳方案。
我就是我,是不一样的烟火
8楼2016-03-10 13:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Bio-Way 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见