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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平，特别是可溶性表达？
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Bio-Way

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平，特别是可溶性表达？

如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平，特别是可溶性表达？
求交流
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1楼 2015-10-25 23:33:24
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
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提高表达量，要么在克隆上优化，要么在诱导表达上优化，后者更多一些，诱导时间，诱导温度，诱导剂加入时间，诱导剂终浓度这些都要优化。
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2楼2015-10-26 08:57:56
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这问题问的。。。
这个问题是最困扰做蛋白表达与纯化的人的。具体事例具体分析，比如大肠杆菌表达蛋白本身表达量就大，但是表达的大都是包涵体，想要获得可溶性蛋白，就需要做复性，或是再设计实验时就想办法让其在上清中表达。一般就要通过基因优化，载体宿主优化筛选，表达条件优化，诱导条件优化等等。
这里有篇比较适合这个问题的文章，你可以看看：原核蛋白可溶性表达策略及实验方案
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-10-26 09:32:49
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
4楼2015-10-26 22:46:03
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liyang12039

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
前期构建个表达重组质粒，后面对诱导条件进行优化
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5楼2015-10-27 12:55:08
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MarchZR

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何不做真核真核蛋白表达可以一试 原核的话基因优化是重点
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6楼2015-10-27 13:44:35
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)
加可溶性Tag，如GST、SUMO；以及降低诱导温度，可低至28度。
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7楼2015-10-29 00:11:42
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)
★
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可溶性优化挺复杂的，除了基因优化外，还要考虑到宿主感受态细胞比如分子伴侣等，诱导表达时注意要低温，IPTG的含量，培养基的营养，诱导后的时间，可通过排列组合的方式得出最佳方案。
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我就是我，是不一样的烟火
8楼2016-03-10 13:33:25
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