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新虫 (初入文坛)

[交流] 如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平,特别是可溶性表达?

如何提高外源蛋白在原核细胞里的表达水平,特别是可溶性表达?
求交流
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


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提高表达量,要么在克隆上优化,要么在诱导表达上优化,后者更多一些,诱导时间,诱导温度,诱导剂加入时间,诱导剂终浓度这些都要优化。
2楼2015-10-26 08:57:56
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


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这问题问的。。。
这个问题是最困扰做蛋白表达与纯化的人的。具体事例具体分析,比如大肠杆菌表达蛋白本身表达量就大,但是表达的大都是包涵体,想要获得可溶性蛋白,就需要做复性,或是再设计实验时就想办法让其在上清中表达。一般就要通过基因优化,载体宿主优化筛选,表达条件优化,诱导条件优化等等。
这里有篇比较适合这个问题的文章,你可以看看:原核蛋白可溶性表达策略及实验方案
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
3楼2015-10-26 09:32:49
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)


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4楼2015-10-26 22:46:03
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liyang12039

新虫 (初入文坛)


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前期构建个表达重组质粒,后面对诱导条件进行优化
5楼2015-10-27 12:55:08
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MarchZR

银虫 (小有名气)


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何不做真核真核蛋白表达可以一试 原核的话基因优化是重点
6楼2015-10-27 13:44:35
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

加可溶性Tag,如GST、SUMO;以及降低诱导温度,可低至28度。
7楼2015-10-29 00:11:42
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)


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可溶性优化挺复杂的,除了基因优化外,还要考虑到宿主感受态细胞比如分子伴侣等,诱导表达时注意要低温,IPTG的含量,培养基的营养,诱导后的时间,可通过排列组合的方式得出最佳方案。
我就是我,是不一样的烟火
8楼2016-03-10 13:33:25
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