| 查看: 11973 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
a13515517892木虫 (小有名气)
|
[交流]
qpcr实验复孔后的问题 已有8人参与
|
||
|
做细胞水平的验证时，发生了很诡异的结果，就是我的目的基因都P出来，并且重现性和复孔之间的差距都很小，但是内参基因GAPDH确很不稳定，复孔之间会差5个以上的Ct值，我做了8次了，每次都不一样，而且差距都很大，复孔之间始终存在很大的差异，以前做组织时都没有这种现象，但是GAPDH的溶解曲线峰值很好，都是83.5,而且没有杂峰。我为了防止可能是自己操作的误差，把所有Mix和模板，引物都加在一个管子里混匀了，在分到不同的PCR管中，可是复孔之间还是差距很大。我做了4个复孔，有3个复孔的Ct12，有1个复孔是4。跑胶的结果是12和4的复孔的亮度没什么区别，你觉得可能是什么原因呢？ 组织和细胞水平一起做的时候，组织中的GAPDH都很正常，复孔之间没有什么差距，就是细胞特别不稳定。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有221人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
已经有4人回复
- 用gDNA做定量PCR,结果复孔差异性很大，以前做cDNA时都没出现过这种情况
已经有0人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（二）
已经有12人回复
懒蛋
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 7107.7
- 散金: 318
- 红花: 9
- 沙发: 1
- 帖子: 1809
- 在线: 356.5小时
- 虫号: 1231871
- 注册: 2011-03-13
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2015-10-25 23:51:39
444565008qq
新虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 389
- 散金: 2
- 红花: 1
- 帖子: 135
- 在线: 41.2小时
- 虫号: 3536386
- 注册: 2014-11-14
- 专业: 分子与进化生态学
2楼2015-10-25 19:52:00
3楼2015-10-25 21:43:25
懒蛋
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 7107.7
- 散金: 318
- 红花: 9
- 沙发: 1
- 帖子: 1809
- 在线: 356.5小时
- 虫号: 1231871
- 注册: 2011-03-13
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
5楼2015-10-25 23:53:43
100