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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

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11楼2015-10-24 20:09:48
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q120465872

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 20:06:44
谢谢你的建议,我这是连续做了五个克隆后第六个出现这个问题,一直想不通,看来以后需要这样设计引物了。另外请教一下,如果是残留,为何会在抗性培养基里生长却没有质粒?
...

这个问题很复杂了,可能是杂菌,也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利,有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了,但是一旦出问题,就必须拿出来用了。那就是做对照,可能出问题的每一步都做对照。千万不要着急哦,静下心来仔细梳理一遍自己的实验流程,想想可能出问题的地方,甚至休息一天半天的再重做,试剂有疑问的也重配。
另外不知道你是什么载体、条带大小?
赐予我力量,去改变我所能改变的;赐予我勇气,去接受我所不能改变的;并赐予我智慧,去分辨这两者。
12楼2015-10-24 20:31:24
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by q120465872 at 2015-10-24 20:31:24
这个问题很复杂了,可能是杂菌,也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利,有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了,但是一旦出问题,就必须拿出来用了。那就是做对照,可能出问题的每一步都做对照 ...

根据我做大肠一些年的经验判断,杂菌的可能性比较小。我以前没有这个问题是因为我们之前是不做菌液或菌落pcr的,换个地方后为省钱要求做,于是以前没见过的问题就出来了,有些问题想想就知道原因,但这个问题我比较困惑,没有质粒却能扩出目的大小条带还能生长,有没有可能是质粒被整合到基因组上了呢?至于载体与目的基因大小都是很平常的那种,都不超过3k。

发自小木虫Android客户端
13楼2015-10-24 20:45:01
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 19:00:12
谢谢!
...

不客气~~
14楼2015-10-25 02:28:44
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tolobio

新虫 (小有名气)


引用回帖:
11楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 20:09:48
做推销不是这样子的吧。
...

打扰了。不好意思。不过,还是真心希望能够提供帮助。祝您实验顺利!
15楼2015-10-25 09:27:57
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qs8lhy86

新虫 (初入文坛)

题主,我遇到的问题和你差不多。我的重组菌也在抗性平板上长出来了,PCR很亮,提质粒也有,但是质粒酶切后看不到目的基因的条带。请问你的这个问题后来怎么样了。是怎么解决的?

发自小木虫Android客户端
16楼2016-12-02 11:21:45
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