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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

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11楼2015-10-24 20:09:48

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q120465872

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

10楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 20:06:44
谢谢你的建议，我这是连续做了五个克隆后第六个出现这个问题，一直想不通，看来以后需要这样设计引物了。另外请教一下，如果是残留，为何会在抗性培养基里生长却没有质粒？
...

这个问题很复杂了，可能是杂菌，也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利，有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了，但是一旦出问题，就必须拿出来用了。那就是做对照，可能出问题的每一步都做对照。千万不要着急哦，静下心来仔细梳理一遍自己的实验流程，想想可能出问题的地方，甚至休息一天半天的再重做，试剂有疑问的也重配。
另外不知道你是什么载体、条带大小？

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赐予我力量，去改变我所能改变的；赐予我勇气，去接受我所不能改变的；并赐予我智慧，去分辨这两者。

12楼2015-10-24 20:31:24

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wuyuanqing

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引用回帖:

12楼: Originally posted by q120465872 at 2015-10-24 20:31:24
这个问题很复杂了，可能是杂菌，也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利，有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了，但是一旦出问题，就必须拿出来用了。那就是做对照，可能出问题的每一步都做对照 ...

根据我做大肠一些年的经验判断，杂菌的可能性比较小。我以前没有这个问题是因为我们之前是不做菌液或菌落pcr的，换个地方后为省钱要求做，于是以前没见过的问题就出来了，有些问题想想就知道原因，但这个问题我比较困惑，没有质粒却能扩出目的大小条带还能生长，有没有可能是质粒被整合到基因组上了呢？至于载体与目的基因大小都是很平常的那种，都不超过3k。

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13楼2015-10-24 20:45:01

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