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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒的验证
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)
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11楼2015-10-24 20:09:48
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q120465872

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 20:06:44
谢谢你的建议，我这是连续做了五个克隆后第六个出现这个问题，一直想不通，看来以后需要这样设计引物了。另外请教一下，如果是残留，为何会在抗性培养基里生长却没有质粒？
...

这个问题很复杂了，可能是杂菌，也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利，有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了，但是一旦出问题，就必须拿出来用了。那就是做对照，可能出问题的每一步都做对照。千万不要着急哦，静下心来仔细梳理一遍自己的实验流程，想想可能出问题的地方，甚至休息一天半天的再重做，试剂有疑问的也重配。
另外不知道你是什么载体、条带大小？
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赐予我力量，去改变我所能改变的；赐予我勇气，去接受我所不能改变的；并赐予我智慧，去分辨这两者。
12楼2015-10-24 20:31:24
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by q120465872 at 2015-10-24 20:31:24
这个问题很复杂了，可能是杂菌，也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利，有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了，但是一旦出问题，就必须拿出来用了。那就是做对照，可能出问题的每一步都做对照 ...

根据我做大肠一些年的经验判断，杂菌的可能性比较小。我以前没有这个问题是因为我们之前是不做菌液或菌落pcr的，换个地方后为省钱要求做，于是以前没见过的问题就出来了，有些问题想想就知道原因，但这个问题我比较困惑，没有质粒却能扩出目的大小条带还能生长，有没有可能是质粒被整合到基因组上了呢？至于载体与目的基因大小都是很平常的那种，都不超过3k。

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13楼2015-10-24 20:45:01
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 19:00:12
谢谢！
...

不客气~~
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14楼2015-10-25 02:28:44
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tolobio

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by wuyuanqing at 2015-10-24 20:09:48
做推销不是这样子的吧。
...

打扰了。不好意思。不过，还是真心希望能够提供帮助。祝您实验顺利！
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15楼2015-10-25 09:27:57
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qs8lhy86

新虫 (初入文坛)
题主，我遇到的问题和你差不多。我的重组菌也在抗性平板上长出来了，PCR很亮，提质粒也有，但是质粒酶切后看不到目的基因的条带。请问你的这个问题后来怎么样了。是怎么解决的？

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16楼2016-12-02 11:21:45
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