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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
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在线: 243.7小时
虫号: 1210774
注册: 2011-02-23
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 重组质粒的验证已有2人参与

各位大侠，本人最近做一个克隆，转化后挑取单克隆，LB摇菌后，进行菌液PCR，引物为我克隆基因的上下游引物，结果显示，有两个克隆出现目的大小条带，而且亮度很大（远远高于marker中最亮的条带），于是信心满满地提取质粒进行酶切验证，结果，电泳显示无任何条带，将质粒上样后也五条带，怀疑是试剂盒的问题后，换一种试剂盒提取，提取物上样电泳显示，没有质粒。这是为什么呢？请赐教，谢谢！

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1楼 2015-10-24 02:19:51

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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

12楼: Originally posted by q120465872 at 2015-10-24 20:31:24
这个问题很复杂了，可能是杂菌，也可能是其他未知原因。
分子实验如果一直顺利，有一个重要的方法或者说实验原则一直被我们忽视了，但是一旦出问题，就必须拿出来用了。那就是做对照，可能出问题的每一步都做对照 ...

根据我做大肠一些年的经验判断，杂菌的可能性比较小。我以前没有这个问题是因为我们之前是不做菌液或菌落pcr的，换个地方后为省钱要求做，于是以前没见过的问题就出来了，有些问题想想就知道原因，但这个问题我比较困惑，没有质粒却能扩出目的大小条带还能生长，有没有可能是质粒被整合到基因组上了呢？至于载体与目的基因大小都是很平常的那种，都不超过3k。

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