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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
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虫号: 1210774
注册: 2011-02-23
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 重组质粒的验证已有2人参与

各位大侠，本人最近做一个克隆，转化后挑取单克隆，LB摇菌后，进行菌液PCR，引物为我克隆基因的上下游引物，结果显示，有两个克隆出现目的大小条带，而且亮度很大（远远高于marker中最亮的条带），于是信心满满地提取质粒进行酶切验证，结果，电泳显示无任何条带，将质粒上样后也五条带，怀疑是试剂盒的问题后，换一种试剂盒提取，提取物上样电泳显示，没有质粒。这是为什么呢？请赐教，谢谢！

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1楼 2015-10-24 02:19:51

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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by q120465872 at 2015-10-24 20:02:00
我来完整解答你的问题。
首先，你的菌液PCR设计方式不对。从连接转化到挑单克隆菌液PCR这一套完整流程走下来，你最开始做连接的PCR产物还是残留在体系里的，他们并没有反应完全，可能随后续的操作一直存在于体系中 ...

谢谢你的建议，我这是连续做了五个克隆后第六个出现这个问题，一直想不通，看来以后需要这样设计引物了。另外请教一下，如果是残留，为何会在抗性培养基里生长却没有质粒？

发自小木虫Android客户端