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lylyly2006

木虫 (正式写手)

[交流] 关于构建载体移码问题 已有3人参与

设计引物构建载体后测序,通过测序结果怎样去检测有没有移码问题,就是怎么看有没有导致后面的标签蛋白不能表达。例如我的顺序是启动子+基因+Myc标签蛋白,这个蛋白编码是从基因的atg开始,还是rbs。如果是标签蛋白+基因,这个基因还需要atg吗?怎么通过测序结果看有没有移码,有没有软件推荐

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tolobio

新虫 (小有名气)

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nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 09:57:37
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2楼2015-10-24 06:34:26
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鹄的什么的

新虫 (初入文坛)


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送红花一朵
无论标签在前在后,都是从启动子后面的kozak序列后的第一个atg开始的,至于融合表达的后面的基因的atg有没有都没有关系,没有任何影响。测序结果怎么看有没有移码,一般的序列分析软件都能做到。推荐国人做的BioXM,简单直观;或者DNAman,多序列比对功能非常强大。只需要对你的测序结果做一个ORF分析就好了,然后和你的目的基因的氨基酸序列对比,后者可手工加上标签翻译出来的氨基酸序列。以上。

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3楼2015-10-24 11:34:38
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lylyly2006

木虫 (正式写手)

送红花一朵
4楼2015-10-24 12:57:35
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行者孔徒弟

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是疑惑这一点。蛋白编码还是从atg开始吧。如果载体标签前面有atg,基因就不需要atg了吧。我也不知道如何通过测序结果来看是否移码。
5楼2015-11-23 09:10:02
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