| 查看: 5234 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
急！PMD19T为载体，转化用大肠杆菌DH5a，提出来的质粒长度还到2000bp 已有4人参与
|
||
|
最近在做定量PCR的实验，所以需要含有目的片段的质粒做标准曲线，然后问题就来了 我是以pMD19T为载体连接，目的片段长度是120bp，转化用大肠杆菌DH5a，挑取单克隆后做菌液PCR，是以M13-47和RV-M做为通用引物，扩增出的片段为250bp左右，测序也是对的，获得了阳性克隆，到这里都很正常； 之后我用相应的菌液质粒小提，提出来的质粒长度还到2000bp，要知道载体本身长2692bp，加上目的片段应该接近3000bp,反复提了几次都是2000的片段，以质粒为模板用目的基因的特异性引物扩增，反而能得到一条3000bp左右的模糊条带，但是并没有目标片段，这里值得一提的是我之前得到过3000bp的正确长度的质粒，特异引物也是正确的，因为这个基因的定量PCR我已经进行了一半了 求大神指点啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
足下客
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 10
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1858.8
- 散金: 211
- 红花: 12
- 帖子: 888
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 426612
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 临床分子生物学检验
9楼2015-10-27 16:55:49
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:00:05
nono2009: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:00:05
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-10-23 11:09:07
肥猫p
木虫 (正式写手)
- 应助: 94 (初中生)
- 金币: 2763.1
- 散金: 145
- 红花: 10
- 帖子: 340
- 在线: 189.3小时
- 虫号: 1709733
- 注册: 2012-03-22
- 专业: 微生物资源与分类学
3楼2015-10-23 12:35:51
4楼2015-10-23 14:53:52
