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想问下各位虫友，这样的RNA能用么 已有1人参与
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小女子刚开始提取RAN，材料来源于鱼体肝脏、脾脏和肠黏膜。我是取样后直接将组织放在TRIZOL中的。 所用匀浆器是180℃烘烤8个小时，枪头是买的现成RNase free，所用水（75%酒精和电解液）都是1-2%DEPC水搅拌4小时，再高温高压灭菌的。操作过程戴口罩，一次性手套也经常换。样品是2015年6月份取得，一直在-80℃冰箱。 提取方法如下： 1. 组织匀浆处理 2. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。 3. 2-8℃10000×g离心15分钟。 4. 转移上清液到新的管子中，我取了500ul 5.加入500ul异丙醇，室温放置10分钟。 8. 2-8℃10000×g离心10分钟，移去上清。 9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。 10.剩余样品短暂离心后用枪头吸出多余的液体50-100μl无RNase的水，用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟。 所提取的RNA跑琼脂糖凝胶电泳，2%的，结果感觉不是很好。10月15好提取的样品上面两条带还是比较亮，后来的感觉降解了很多。 就想问下，像这样质量的RNA做反转录可以用么？我只打算反转录再做荧光定量的。 操作过程也希望各个大神们可以指点一二，谢谢。 有八个样品的是15号提取的，六个样品的是20号提取的。谢谢各位了  10-15下午2.jpg  10.20下午第一次2.jpg |
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shucanwei
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