24小时热门版块排行榜    

查看: 1546  |  回复: 12

真果粒

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒构建 已有2人参与

本人在构建质粒,但在连接片段后粗提发现提得的质粒除倒数第四泳道外均比对照低,这是个什么情况?求大神指导

质粒构建
20151020粗提验证.jpg
回复此楼
徘徊在街头,不知何去何从。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
啥叫粗提?你没用试剂盒吗?感觉是不是质粒降解了?还是把基因组啊,RNA提出来啦?

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-10-20 22:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

真果粒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-20 22:21:50
啥叫粗提?你没用试剂盒吗?感觉是不是质粒降解了?还是把基因组啊,RNA提出来啦?

化转后涂板,量比较大,直接用酚氯仿粗提。一般最上面的是细菌基因组,第二条带是质粒。

[ 发自小木虫客户端 ]
徘徊在街头,不知何去何从。
3楼2015-10-20 22:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

真果粒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 真果粒 at 2015-10-20 22:29:43
化转后涂板,量比较大,直接用酚氯仿粗提。一般最上面的是细菌基因组,第二条带是质粒。
...

是转化

[ 发自小木虫客户端 ]
徘徊在街头,不知何去何从。
4楼2015-10-20 22:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

构建质粒至少用试剂盒提取一下啊,你是不是没有加RNA酶?

发自小木虫IOS客户端
5楼2015-10-20 22:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

余文军

新虫 (正式写手)

6楼2015-10-20 23:12:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evil丶zero

金虫 (小有名气)

你是在挑重组子吧。按照常规碱裂解法抽提质粒的话,这个应该不是质粒被单切的原因,线性化质粒跑得慢一些。

发自小木虫Android客户端
7楼2015-10-20 23:29:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

真果粒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-10-20 23:29:15
你是在挑重组子吧。按照常规碱裂解法抽提质粒的话,这个应该不是质粒被单切的原因,线性化质粒跑得慢一些。

是在挑重组子,用的是单酶切。连接之前酶切的质粒跑胶没问题,酶切回收后的目的片段由于浓度较大跑胶有条较明显的杂带。

[ 发自小木虫客户端 ]
徘徊在街头,不知何去何从。
8楼2015-10-21 00:11:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

真果粒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 余文军 at 2015-10-20 23:12:48
DNA 的问题

具体是可能是哪里出了问题?谢谢😜

[ 发自小木虫客户端 ]
徘徊在街头,不知何去何从。
9楼2015-10-21 00:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tolobio

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:08:26
本帖内容被屏蔽

10楼2015-10-21 08:12:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 真果粒 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:40 by oxidpl
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利,还能抢救一下吗? +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
[有机交流] 有机合成以后会不会被AI改变?做科研的虫友怎么看 +5 zapen 2026-09-20 8/400 2026-09-23 17:21 by tianxiaoxian
信息提示
请填处理意见