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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒构建
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真果粒

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒构建 已有2人参与

本人在构建质粒，但在连接片段后粗提发现提得的质粒除倒数第四泳道外均比对照低，这是个什么情况？求大神指导

质粒构建
20151020粗提验证.jpg
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徘徊在街头，不知何去何从。
1楼 2015-10-20 21:41:59
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
啥叫粗提？你没用试剂盒吗？感觉是不是质粒降解了？还是把基因组啊，RNA提出来啦？

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2楼2015-10-20 22:21:50
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真果粒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-20 22:21:50
啥叫粗提？你没用试剂盒吗？感觉是不是质粒降解了？还是把基因组啊，RNA提出来啦？

化转后涂板，量比较大，直接用酚氯仿粗提。一般最上面的是细菌基因组，第二条带是质粒。

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徘徊在街头，不知何去何从。
3楼2015-10-20 22:29:43
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真果粒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 真果粒 at 2015-10-20 22:29:43
化转后涂板，量比较大，直接用酚氯仿粗提。一般最上面的是细菌基因组，第二条带是质粒。
...

是转化

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徘徊在街头，不知何去何从。
4楼2015-10-20 22:30:33
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

构建质粒至少用试剂盒提取一下啊，你是不是没有加RNA酶？

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5楼2015-10-20 22:45:45
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余文军

新虫 (正式写手)
DNA 的问题

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6楼2015-10-20 23:12:48
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
你是在挑重组子吧。按照常规碱裂解法抽提质粒的话，这个应该不是质粒被单切的原因，线性化质粒跑得慢一些。

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7楼2015-10-20 23:29:15
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真果粒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-10-20 23:29:15
你是在挑重组子吧。按照常规碱裂解法抽提质粒的话，这个应该不是质粒被单切的原因，线性化质粒跑得慢一些。

是在挑重组子，用的是单酶切。连接之前酶切的质粒跑胶没问题，酶切回收后的目的片段由于浓度较大跑胶有条较明显的杂带。

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徘徊在街头，不知何去何从。
8楼2015-10-21 00:11:08
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真果粒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 余文军 at 2015-10-20 23:12:48
DNA 的问题

具体是可能是哪里出了问题？谢谢😜

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徘徊在街头，不知何去何从。
9楼2015-10-21 00:13:48
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tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:08:26
本帖内容被屏蔽
10楼2015-10-21 08:12:35
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