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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 这几天跑胶不太顺利，测了一下DNA的260/280，有些问题需要指导。
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LostInLab

新虫 (初入文坛)

[交流] 这几天跑胶不太顺利，测了一下DNA的260/280，有些问题需要指导。 已有8人参与

前些日子发过帖子关于F2群体跑胶跑不出来结果，得出原因很大可能是DNA频繁反复冻融降解了。
于是我重新稀释了DNA，可是发现还有问题，反复跑过几次，有些能跑出来，有些又跑不出来。就去测了DNA的260/280

大概信息是这样的，260/280比值在2.0左右徘徊，±0.05左右，但是我看有人说是260值在 0.1-0.5之间，得到的比例才比较靠谱。所以不知道是不是DNA又出问题了

求教大家了， 至于其他的条件缓冲液是新配的，胶原液也是新配的。引物都是重复多次筛选好的。
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1楼 2015-10-16 16:43:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ThinkerDay

金虫 (正式写手)
★
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告诉你，DNA很经折腾。

发自小木虫Android客户端
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3楼2015-10-17 09:41:00
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
跟RNA相比，DNA就是小强！很强的，哈哈，估计是别的原因吧
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5楼2015-10-17 20:26:03
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chs4502

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是用分光光度计测的话，OD600要小于1.0，如果用NanoDrop就无所谓了。
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7楼2015-10-19 12:24:50
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普通回帖

LostInLab

新虫 (初入文坛)
求教求教啊大家
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2楼2015-10-17 08:31:49
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
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怎么就不怀疑一下引物反复冻融出现问题呢？
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
4楼2015-10-17 15:18:06
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jianguochen

新虫 (小有名气)
★
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电泳与分光光度计应该就能看出DNA的大概情况了，看你的比值是没什么问题。当然，一些盐类污染也会影响比值，如果确定DNA没有降解，而且PCR体系没问题，那就可能有一些PCR抑制剂污染，污染物的判断可以看看你的提取或者纯化方法。
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6楼2015-10-17 22:02:24
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ziyou.abc

新虫 (初入文坛)
★
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DNA浓度大概多少，上样少于50ng就不易看到了
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8楼2015-10-19 16:46:28
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卷舒_ray

金虫 (小有名气)
★
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DNA 要1.8比值更好吧？
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9楼2015-10-19 16:46:55
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ziyou.abc

新虫 (初入文坛)
你的260/280正常，没问题
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10楼2015-10-19 16:47:41
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