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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白纯化大小不一致
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我心中有猛虎

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化大小不一致 已有4人参与

最近刚开始做抗体，在蛋白纯化上遇到问题，用的是pGEX-4T-3载体，带有GST，大小是26kd，我自己设计的抗原表位大小是13kd，但是蛋白纯化过程中纯化出来的蛋白大小为34kd左右，大小和预计的差太多，这个是什么原因造成的呢？
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1楼 2015-10-14 12:38:04
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:10:38
5KD也还差不太多吧
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2楼2015-10-14 14:25:27
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我心中有猛虎

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-14 14:25:27
5KD也还差不太多吧

你的意思是没有问题？继续往下做吗？
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3楼2015-10-15 16:21:29
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
我心中有猛虎: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-10-15 22:14:49
我心中有猛虎: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-10-26 09:24:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我心中有猛虎 at 2015-10-15 16:21:29
你的意思是没有问题？继续往下做吗？...

用其他方法鉴定下，确认下分子大小。你现在是用什么方法测定的分子量
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4楼2015-10-15 17:00:45
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前做蛋白表达纯化时总碰上这种情况，一般比较小的差别是不会影响实验结果的。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
5楼2015-10-16 09:21:06
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科大小飞

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白在表达后可能存在蛋白修饰的，比如磷酸化  还有GST标签也影响它的分子量的。所以很正常哦
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天道酬勤
6楼2015-10-16 10:15:14
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-10-19 00:11:36
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