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busen

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助!如何把线性双链DNA病毒基因组(36kb)和载体元件直接连起来 已有2人参与

因为要构建腺病毒载体,需要把腺病毒的全基因组和载体元件(复制原点、抗性基因等)直接连起来

已经尝试了通过同源重组的方法:构建包含载体元件以及重组同源臂的重组质粒(左右同源臂分别为1500bp,2500bp,图谱如下),共电转BJ5183感受态,没有筛到阳性克隆

尝试采用TAKARA INFUSION试剂盒,想通过一步重组法直接将载体元件和腺病毒末端连接起来,也筛不到阳性克隆

以上两种方法都重复了好些遍,不断改变载体的基因组的浓度和摩尔比,都无法得到目的克隆菌株,不知道出了什么问题,求大神解答

求助!如何把线性双链DNA病毒基因组(36kb)和载体元件直接连起来
腺病毒基因组图谱.JPG


求助!如何把线性双链DNA病毒基因组(36kb)和载体元件直接连起来-1
重组质粒图谱.JPG
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个片段太大了,回收和连接的效率都会很低的,建议找专业的公司帮你完成。。
学习再学习,努力再努力。
2楼2015-10-26 15:25:19
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2020-11-12 04:45:25
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fengxueren

新虫 (正式写手)

4楼2021-02-18 00:34:49
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fengxueren

新虫 (正式写手)

建议用酵母同源重组构建。

发自小木虫Android客户端
5楼2021-02-18 00:35:13
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