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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳图都是一片白，没有条带
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛

[求助] 电泳图都是一片白，没有条带 已有4人参与

这是我今天跑的电泳图，为什么什么都没有，都是一大片白，求高手指点！！
我前两天用同样的模板，同样的引物，同样的条件跑出来过想要的条带，想重复一次，可是这次却什么都没有，不知道怎么回事，急求大家帮助！！
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1楼 2015-10-11 14:51:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-12 13:42:14
董小露: 金币+15, ★★★很有帮助 2015-10-12 18:13:55
把电泳槽中的缓冲液换掉，用新配的缓冲液，胶也重配，EB加得太多了，不需要加那么多。你以前扩出来的条带有没有测序过？确定是你要的序列吗？模板是保存在哪里的？
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2楼2015-10-12 10:32:53
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-12 13:42:22
Marker 跑的就不好，条带弥散的很严重，拖尾严重
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5楼2015-10-12 11:16:48
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鹄的什么的

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-13 20:38:15
董小露: 金币+5, ★有帮助 2015-10-14 15:23:57
个人认为，问题不在于没有PCR产物，只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西，造成了凝胶阻滞，影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题，如果能够排除loading buffer的问题的话，应该是你的PCR体系构建的有问题，或者大剂量的PCR产物长时间低温保存造成的部分碱基对紊乱，前者请自行摸索条件，后者在上样前56℃水浴2-3min即可。
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14楼2015-10-12 20:35:21
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普通回帖

董小露

金虫 (小有名气)

小牛
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2015-10-12 10:32:53
把电泳槽中的缓冲液换掉，用新配的缓冲液，胶也重配，EB加得太多了，不需要加那么多。你以前扩出来的条带有没有测序过？确定是你要的序列吗？模板是保存在哪里的？

我是放在EB里泡了半个小时的，你是觉得太亮么，我用正常光觉得不清楚，所以用的弱光照的，可能就太亮了，条带的位置大概就是我想要的那个位置，主要是现在连条带都没有，那我要不换换缓冲液试一下
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3楼2015-10-12 10:39:14
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2015-10-12 10:32:53
把电泳槽中的缓冲液换掉，用新配的缓冲液，胶也重配，EB加得太多了，不需要加那么多。你以前扩出来的条带有没有测序过？确定是你要的序列吗？模板是保存在哪里的？

可是如果是缓冲液的问题，那maker跑的挺好的呀，没有出问题，是不是我扩增的时候出什么问题了
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4楼2015-10-12 10:40:36
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-12 13:42:29
泡在EB里？我们都是配胶的时候，把EB加到胶里，混匀
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6楼2015-10-12 11:18:08
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tlkitty

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 董小露 at 2015-10-12 10:39:14
我是放在EB里泡了半个小时的，你是觉得太亮么，我用正常光觉得不清楚，所以用的弱光照的，可能就太亮了，条带的位置大概就是我想要的那个位置，主要是现在连条带都没有，那我要不换换缓冲液试一下...

不用泡半个小时那么久，我们一般泡7min，然后用清水泡，洗掉表面eb，也是很清楚的

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7楼2015-10-12 11:49:54
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
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本帖内容被屏蔽
8楼2015-10-12 14:25:57
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛
引用回帖:
5楼: Originally posted by 足下客 at 2015-10-12 11:16:48
Marker 跑的就不好，条带弥散的很严重，拖尾严重

我这次换缓冲液了，可是还是那样。。。我的模板是4度保存的，以前也是这么放着的，没有出现过这种问题，还有哪里可能出问题了么
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9楼2015-10-12 18:02:10
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aixiachun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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加样孔很亮，说明PCR的酶加多了。因为就算是染料问题，你的marker至少能分辨出来。你这种情况很大可能是PCR条件，包括酶、引物、模板等。
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10楼2015-10-12 18:26:22
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