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落木风声

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by tlkitty at 2015-10-12 11:49:54
不用泡半个小时那么久,我们一般泡7min,然后用清水泡,洗掉表面eb,也是很清楚的
...

请问你们用EB染色,那个染色液的浓度是多少啊?
这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
11楼2015-10-12 18:41:44
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tlkitty

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 落木风声 at 2015-10-12 18:41:44
请问你们用EB染色,那个染色液的浓度是多少啊?...

这个没法算,因为老师都是接了一盒子水以后滴上几滴eb,水有颜色了就行了,浓度很低的。

发自小木虫Android客户端
12楼2015-10-12 20:07:26
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tlkitty

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by tlkitty at 2015-10-12 20:07:26
这个没法算,因为老师都是接了一盒子水以后滴上几滴eb,水有颜色了就行了,浓度很低的。
...

不过本科是那样做的,现在是在做胶的时候就加上eb了

发自小木虫Android客户端
13楼2015-10-12 20:20:13
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鹄的什么的

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-13 20:38:15
董小露: 金币+5, 有帮助 2015-10-14 15:23:57
个人认为,问题不在于没有PCR产物,只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西,造成了凝胶阻滞,影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题,如果能够排除loading buffer的问题的话,应该是你的PCR体系构建的有问题,或者大剂量的PCR产物长时间低温保存造成的部分碱基对紊乱,前者请自行摸索条件,后者在上样前56℃水浴2-3min即可。
14楼2015-10-12 20:35:21
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落木风声

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by tlkitty at 2015-10-12 20:07:26
这个没法算,因为老师都是接了一盒子水以后滴上几滴eb,水有颜色了就行了,浓度很低的。
...

你们就染色7min吗?我都染色45min
这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
15楼2015-10-12 20:53:51
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛

引用回帖:
10楼: Originally posted by aixiachun at 2015-10-12 18:26:22
加样孔很亮,说明PCR的酶加多了。因为就算是染料问题,你的marker至少能分辨出来。你这种情况很大可能是PCR条件,包括酶、引物、模板等。

我之前用同样的条件跑出来过,都没有问题,后来想重复一下,才成现在这样的
16楼2015-10-13 10:40:55
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛

引用回帖:
15楼: Originally posted by 落木风声 at 2015-10-12 20:53:51
你们就染色7min吗?我都染色45min...

我们这都是染色半小时的
17楼2015-10-13 10:42:39
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛

引用回帖:
14楼: Originally posted by 鹄的什么的 at 2015-10-12 20:35:21
个人认为,问题不在于没有PCR产物,只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西,造成了凝胶阻滞,影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题,如果能够排除loading buffer的问题的话,应该是你的PCR体 ...

我之前用同样的模板和条件做来着,就有正常条带,点样孔也没有亮,而且我是P完马上就跑电泳的
18楼2015-10-13 10:46:29
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湘西小伙儿

金虫 (正式写手)

maker都跑的那么差有拖尾,建议换一下电泳液或者是重新配块胶看是不是胶的问题,看看是不是这边外因造成的,然后再进一步确定是引物的问题还是pcr条件等其他的内因
19楼2015-10-15 11:11:48
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tolobio

新虫 (小有名气)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
肯定不是电泳的问题。虽然电泳也不太好。应该是PCR的问题。
模板是否降解了?PCR的酶是否加多了?退火梯度可以试一下。希望有帮助。
我们也提供分子生物学技术服务tolobio@126.com
20楼2015-10-15 12:13:49
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