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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳图都是一片白，没有条带
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落木风声

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tlkitty at 2015-10-12 11:49:54
不用泡半个小时那么久，我们一般泡7min，然后用清水泡，洗掉表面eb，也是很清楚的
...

请问你们用EB染色，那个染色液的浓度是多少啊？
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这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
11楼2015-10-12 18:41:44
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tlkitty

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 落木风声 at 2015-10-12 18:41:44
请问你们用EB染色，那个染色液的浓度是多少啊？...

这个没法算，因为老师都是接了一盒子水以后滴上几滴eb，水有颜色了就行了，浓度很低的。

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12楼2015-10-12 20:07:26
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tlkitty

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tlkitty at 2015-10-12 20:07:26
这个没法算，因为老师都是接了一盒子水以后滴上几滴eb，水有颜色了就行了，浓度很低的。
...

不过本科是那样做的，现在是在做胶的时候就加上eb了

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13楼2015-10-12 20:20:13
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鹄的什么的

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-13 20:38:15
董小露: 金币+5, ★有帮助 2015-10-14 15:23:57
个人认为，问题不在于没有PCR产物，只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西，造成了凝胶阻滞，影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题，如果能够排除loading buffer的问题的话，应该是你的PCR体系构建的有问题，或者大剂量的PCR产物长时间低温保存造成的部分碱基对紊乱，前者请自行摸索条件，后者在上样前56℃水浴2-3min即可。
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14楼2015-10-12 20:35:21
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落木风声

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tlkitty at 2015-10-12 20:07:26
这个没法算，因为老师都是接了一盒子水以后滴上几滴eb，水有颜色了就行了，浓度很低的。
...

你们就染色7min吗?我都染色45min
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这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
15楼2015-10-12 20:53:51
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛
引用回帖:
10楼: Originally posted by aixiachun at 2015-10-12 18:26:22
加样孔很亮，说明PCR的酶加多了。因为就算是染料问题，你的marker至少能分辨出来。你这种情况很大可能是PCR条件，包括酶、引物、模板等。

我之前用同样的条件跑出来过，都没有问题，后来想重复一下，才成现在这样的
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16楼2015-10-13 10:40:55
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛
引用回帖:
15楼: Originally posted by 落木风声 at 2015-10-12 20:53:51
你们就染色7min吗?我都染色45min...

我们这都是染色半小时的
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17楼2015-10-13 10:42:39
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛
引用回帖:
14楼: Originally posted by 鹄的什么的 at 2015-10-12 20:35:21
个人认为，问题不在于没有PCR产物，只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西，造成了凝胶阻滞，影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题，如果能够排除loading buffer的问题的话，应该是你的PCR体 ...

我之前用同样的模板和条件做来着，就有正常条带，点样孔也没有亮，而且我是P完马上就跑电泳的
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18楼2015-10-13 10:46:29
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湘西小伙儿

金虫 (正式写手)
maker都跑的那么差有拖尾，建议换一下电泳液或者是重新配块胶看是不是胶的问题，看看是不是这边外因造成的，然后再进一步确定是引物的问题还是pcr条件等其他的内因
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19楼2015-10-15 11:11:48
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tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
肯定不是电泳的问题。虽然电泳也不太好。应该是PCR的问题。
模板是否降解了？PCR的酶是否加多了？退火梯度可以试一下。希望有帮助。
我们也提供分子生物学技术服务tolobio@126.com
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20楼2015-10-15 12:13:49
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