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王希lily

新虫 (初入文坛)

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[交流] SDS-PAGE图跑成这样怎么办呢？

最近一直在做蛋白，但是跑SDS-PAGE图总是跑不好，按照刚开始认为是样品处理不好，就重新处理了几次样品，但是结果还是不理想，后来认为是配胶的液体等有问题，就全部按照书上重新配了，但是结果还是遮样，开始MARKER还能跑清楚，重新配了液后就连MARKER 条带都跑不见了。请有经验的亲们指点一下，谢谢了。

SDS-PAGE图

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求高手指点一哈SDS-PAGE图已经有6人回复

1楼 2015-10-07 17:05:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dorecnu

木虫 (正式写手)

应助: 31 (小学生)
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性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
王希lily: 金币+1, 有道理 2015-10-08 10:16:09

第一张图不太好，第二张图尚可。
想要跑一张漂亮的SDS-PAGE图可以改进一下方面：
1. 上样前使用nano-drop或其他方法测定样品总蛋白量，使得每个孔上样量一致且在最佳蛋白量范围，图会好看很多
2. 根据目标蛋白大小选择合适浓度的SDS-PAGE凝胶,小蛋白用15%左右的凝胶,一般大小蛋白使用10-12%浓度凝胶
3. 制作凝胶时浓缩胶与分离胶比例要合适,如果是新手把握不准可以买预制胶
4. 电泳时使用小电压电泳,并使垂直电泳槽置于0-4度环境(可以使用冰盒,也可以至于4度冷柜)
5. 使用预染marker，电泳时可以实时观察marker电泳情况
6. 蛋白条带分辨率不高，可以尝试使用小孔梳子聚集蛋白，往往可以提高条带分辨率