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王希lily

新虫 (初入文坛)

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[交流] SDS-PAGE图跑成这样怎么办呢？

最近一直在做蛋白，但是跑SDS-PAGE图总是跑不好，按照刚开始认为是样品处理不好，就重新处理了几次样品，但是结果还是不理想，后来认为是配胶的液体等有问题，就全部按照书上重新配了，但是结果还是遮样，开始MARKER还能跑清楚，重新配了液后就连MARKER 条带都跑不见了。请有经验的亲们指点一下，谢谢了。

SDS-PAGE图

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求高手指点一哈SDS-PAGE图已经有6人回复

1楼 2015-10-07 17:05:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

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专业: 蛋白质组学

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
王希lily: 金币+2 2015-10-08 10:57:03

重组蛋白表达纯化目的蛋白质条带模糊的相应对策
电泳凝胶浓度选择不当。
低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。
蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。
电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。
避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。
加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

摘自：http://www.detaibio.com/topics/sds-page-faq.html