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ChenYFSCAU

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌RNA提取浓度低 已有1人参与

提取一革兰氏阴性菌的RNA,由于实验条件的要求,采用产毒素培养基(贫瘠培养基)进行摇菌16h后,抽提RNA,此时的菌液浓度已经超过OD600>2.0。在进行RNA抽提时候一直得到的量很低(低于50ng/ul)。
1/不论是用promega SV total RNA提取试剂盒还是用Trizol抽提,得到的量都低。抽提时候所用的菌液量为2mL,电泳时候为两条带。
2/怀疑是不是由于培养基贫瘠而使得RNA量太少,采用取6mL的菌液进行trizol抽提,得到的RNA量稍微提高了一些,在50-60ng/ul之间。但是电泳的时候只有一条带。。
请问,怎么提高我的RNA提取量和提取质量。会不会是培养基造成菌落RNA产量少以外,还使得其较难破壁?
ps:在LB培养基中提取RNA的时候得量适当。300ng/ul。
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加油girl321

禁虫 (小有名气)

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4楼2019-03-22 00:20:14
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hohomina

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有没有试过加微量的溶菌酶先处理下再提?OD大于2的细菌应该十分浓,也有可能是细菌量太多,而trizol量有限,导致细菌被裂解的不彻底,所以RNA量低
2楼2015-12-25 15:29:29
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hohomina at 2015-12-25 15:29:29
有没有试过加微量的溶菌酶先处理下再提?OD大于2的细菌应该十分浓,也有可能是细菌量太多,而trizol量有限,导致细菌被裂解的不彻底,所以RNA量低

嗯。。。。都说到点子上了
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3楼2016-01-28 10:45:03
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