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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 细菌RNA提取浓度低
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ChenYFSCAU

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌RNA提取浓度低 已有1人参与

提取一革兰氏阴性菌的RNA，由于实验条件的要求，采用产毒素培养基（贫瘠培养基）进行摇菌16h后，抽提RNA，此时的菌液浓度已经超过OD600>2.0。在进行RNA抽提时候一直得到的量很低（低于50ng/ul）。
1/不论是用promega SV total RNA提取试剂盒还是用Trizol抽提，得到的量都低。抽提时候所用的菌液量为2mL，电泳时候为两条带。
2/怀疑是不是由于培养基贫瘠而使得RNA量太少，采用取6mL的菌液进行trizol抽提，得到的RNA量稍微提高了一些，在50-60ng/ul之间。但是电泳的时候只有一条带。。
请问，怎么提高我的RNA提取量和提取质量。会不会是培养基造成菌落RNA产量少以外，还使得其较难破壁？
ps：在LB培养基中提取RNA的时候得量适当。300ng/ul。
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1楼 2015-10-05 22:42:47
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加油girl321

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2019-03-22 00:20:14
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hohomina

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有没有试过加微量的溶菌酶先处理下再提？OD大于2的细菌应该十分浓，也有可能是细菌量太多，而trizol量有限，导致细菌被裂解的不彻底，所以RNA量低
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2楼2015-12-25 15:29:29
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hohomina at 2015-12-25 15:29:29
有没有试过加微量的溶菌酶先处理下再提？OD大于2的细菌应该十分浓，也有可能是细菌量太多，而trizol量有限，导致细菌被裂解的不彻底，所以RNA量低

嗯。。。。都说到点子上了
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3楼2016-01-28 10:45:03
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