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冬日夏香

新虫 (小有名气)

[求助] 做免疫荧光怎么看蛋白是在细胞核表达还是胞浆表达 已有2人参与

新手一枚，最近刚开始做免疫荧光，出来的结果不知道怎么看蛋白究竟在哪里表达，有人能解释一下吗
蓝色是细胞核 红色和绿色是两种目标蛋白

做免疫荧光怎么看蛋白是在细胞核表达还是胞浆表达
601 200-4+5+6.jpg
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1楼 2015-10-02 16:41:38
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lubuddy

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冬日夏香 at 2015-10-03 14:40:38
非常感谢，回答的好详细啊。
另外我想确认一下，图中蓝色的是用DAPI染的细胞核，我的其他图片里面红色蛋白基本上都跟蓝色重合，是不是就能说明这个蛋白就是在细胞核中表达的呢？...

嗯，如果红色和你的DAPI共定位很好，是提示了红色蛋白很可能是核蛋白。

如果需要进一步明确该蛋白是否是核蛋白，还需要其他实验手段进一步论证。
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4楼2015-10-03 20:03:52
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lubuddy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-10-03 21:50:14
你的图中间有一个细胞有很明显的红色和蓝色的共定位，提示红色蛋白可能有核定位，但是其他的细胞不明显；同时红色和绿色几乎无法勾勒细胞形态，似乎不是胞浆蛋白或膜蛋白。然后我觉得你的红色和绿色荧光似乎很弱...可能是什么原因呢？

如果你蓝色是DAPI或者Hoechst等DNA染色剂，那么红色或绿色与蓝色的共定位提示该蛋白很可能是核定位的蛋白，你可以序列分析一下你感兴趣的蛋白是否有核定位序列（neuclear localization sequence），或者是否具有跨膜序列等指示可能是膜蛋白。

然后你抗体染色或加入标签标记你感兴趣的蛋白和其他已知的亚细胞器标志物共定位看看；

你还可以使用生化分离的方法分离不同的细胞组分确认你的目的蛋白是否有特别的定位...
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2楼2015-10-03 00:30:21
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冬日夏香

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lubuddy at 2015-10-03 00:30:21
你的图中间有一个细胞有很明显的红色和蓝色的共定位，提示红色蛋白可能有核定位，但是其他的细胞不明显；同时红色和绿色几乎无法勾勒细胞形态，似乎不是胞浆蛋白或膜蛋白。然后我觉得你的红色和绿色荧光似乎很弱... ...

非常感谢，回答的好详细啊。
另外我想确认一下，图中蓝色的是用DAPI染的细胞核，我的其他图片里面红色蛋白基本上都跟蓝色重合，是不是就能说明这个蛋白就是在细胞核中表达的呢？
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3楼2015-10-03 14:40:38
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
红色的是细胞核蛋白没跑
绿的看不清楚，把绿色荧光调亮点，或者抗体多孵育些时间
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2015-10-04 05:52:46
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