| 查看: 2854 | 回复: 12 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
日光海铜虫 (小有名气)
|
[求助]
Red敲除，如何消除或降低假阳性
|
|
|
小弟最近做Red敲除，做了5个月了。最近遇到的问题是，敲除后12h内没长，24h后长出很小的单菌落，鉴定全是假阳性。 操作如下：平板挑单菌落（假单胞菌，L-阿拉伯糖-）接25ml（50mL管子）LB，四环素（pRKaraRed质粒）浓度12.5μg过夜培养做种子液。第二天早晨，1:100接种到新鲜LB+四环素12.5μg，加入0.2%的L-阿拉伯糖。培养至OD=0.4~0.5，冰浴菌液30min，然后离心浓缩，预冷超纯水洗涤四次，预冷10%甘油洗涤四次，200μL10%甘油重悬，取100μL+1μg打靶片段（来自pk18mobsacB），2500V，200Ω，2.5μF，电击时间显示5.1ms，加入室温LB 1mL，30℃孵育2~3h，离心，浓缩后全部涂板四环素+卡那（均10μg）平板，结果24h后才长出来一些小菌落，鉴定全是假阳性。 求大神赐教，为什么会出现这些假阳性？麻烦有经验的虫友支招怎么去除或减少假阳性？ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
日光海
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1508.7
- 红花: 1
- 帖子: 87
- 在线: 60.3小时
- 虫号: 2612459
- 注册: 2013-08-23
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
5楼2018-08-23 09:12:35
2楼2017-03-13 09:39:13
日光海
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1508.7
- 红花: 1
- 帖子: 87
- 在线: 60.3小时
- 虫号: 2612459
- 注册: 2013-08-23
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
3楼2017-11-16 10:15:19
4楼2018-08-22 09:56:05