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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】色谱柱堵了，救命啊！！
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】色谱柱堵了，救命啊！！

我用HPLC测蛋白质分子量（pl-aquagel-oh mixed 8um ）用缓冲液、水做流动相，没走过有机溶剂，现在是柱压过高，不能正常工作，哪位虫虫知道应该怎么办啊

一根柱子要一万多，要是被老板知道了我就废了！！

[ Last edited by lanlang1002 on 2008-9-2 at 13:11 ]
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1楼 2008-09-02 13:07:15
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chvin198489

什么柱子？
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2楼2008-09-02 13:18:46
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syuchenj

金虫 (正式写手)
★
kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~！欢迎经常光临小木虫食品版，谢谢~~！
反冲一下，反冲前注意加一个保护柱。然后再加一个保护柱，正相冲洗。如果你每次上样都是过滤过的，同时流动相也都是过滤过的，那么堵塞柱子的应该是蛋白质，采用稀的蛋白酶溶液反复走，使洗脱不了的蛋白质，或者变性的蛋白质水解，从而可以洗出来，柱压会有所下降。如果是杂质堵塞了柱子，那么即使反冲一下，暂时使柱压下降，这根柱子也报废得差不多了。
如果你知道你的上样的样品中的杂质，那么也可采用相应的溶剂冲洗。
最重要的是，前面要加保护柱。
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3楼2008-09-02 15:00:46
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)
怎么加保护住？什么样的柱子算是保护住呢？

我的样品和流动相都过滤过的
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4楼2008-09-03 12:25:10
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zf851

金虫 (小有名气)
★
kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~！欢迎经常光临小木虫食品版，谢谢~~！
看样子你用的是凝胶柱啊
1.把柱子拆下来 把机器的管路先洗干净
2.把柱子低速反冲（注意流速 因为柱子的两端通常耐压程度是不同的 反冲时候一定要低流速） 注意判断堵住的物质可能是什么 如果你是柱压高 还没到机子自动停机的压力 找个可溶的溶剂慢慢冲就是了
特别提示：注意凝胶柱的最大压力 因为通常反向柱的耐压程度比 凝胶柱高
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5楼2008-09-04 22:50:24
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zf851

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by syuchenj at 2008-9-2 15:00:
反冲一下，反冲前注意加一个保护柱。然后再加一个保护柱，正相冲洗。如果你每次上样都是过滤过的，同时流动相也都是过滤过的，那么堵塞柱子的应该是蛋白质，采用稀的蛋白酶溶液反复走，使洗脱不了的蛋白质，或者变 ...

保护柱 是指在柱前所接的一小段 和色谱柱一样的可拆卸的 柱子 比较小 由柱心和柱套组成 其目的是为了饱和过分析柱的流动相 避免其对柱子固定相的损害；同时也可以避免由于样品处理的不恰当导致 分析柱的堵塞；但保护柱一般也比较贵 通常1000元上下 所以算来并不一定划算 很多机子其实也都没有配备
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6楼2008-09-04 22:54:14
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)
我用缓冲液和水反复走很长时间，没什么效果，反而柱压更高了

可以考虑用酶液洗洗，也有资料说可以把柱子浸泡在酶液中，或过夜，或加超声震荡，不知道这几种方法哪种更合适，有什么不同呢


因为柱子是水凝胶住，从来没做过有机溶剂所以一直走的是水溶液洗

希望会有效！！多谢楼上了，不知道能留个联系方式不，以便更进一步请教
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7楼2008-09-09 13:40:19
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syuchenj

金虫 (正式写手)
★
kidy008(金币+1,VIP+0):热心助人，奖励金币一个，欢迎常顾食品版，谢谢~~！
保护膜柱就可，不一定保护柱，保护膜柱中的保护膜可以反复更换，比较容易。
另外，你是水凝胶柱，最好不要用超声振荡。
如果你的柱子一直用的是缓冲液，而且一直走的是蛋白质，考虑由于蛋白质变性或者沉淀，导致柱压上升，考虑改变离子强度，改变PH，慢慢走。特别是有部分盐溶性蛋白，可以用高离子强度的缓冲液洗涤，部分蛋白，可以采用碱性溶液洗涤（注意柱子的极限PH），最后可以采用酶液缓慢冲洗，浸泡是没有用的。
千万不要用有机溶剂，从你的样品看，十有八九是蛋白沉淀导致柱堵塞。有机溶剂可能使堵塞更严重。
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8楼2008-09-09 15:25:36
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)
我用的是PH9.5的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液走，0.03mol/L,柱压越来越高

后来用缓冲液和水轮流洗，可是没有什么效果，可以考虑用酶液洗洗

用有机溶剂的话一些盐会析出来，呵呵
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9楼2008-09-11 15:05:58
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