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lanlang1002

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】色谱柱堵了,救命啊!!

我用HPLC测蛋白质分子量(pl-aquagel-oh mixed 8um )用缓冲液、水做流动相,没走过有机溶剂,现在是柱压过高,不能正常工作,哪位虫虫知道应该怎么办啊

一根柱子要一万多,要是被老板知道了我就废了!!

[ Last edited by lanlang1002 on 2008-9-2 at 13:11 ]
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)

我用的是PH9.5的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液走,0.03mol/L,柱压越来越高

后来用缓冲液和水轮流洗,可是没有什么效果,可以考虑用酶液洗洗

用有机溶剂的话一些盐会析出来,呵呵
9楼2008-09-11 15:05:58
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syuchenj

金虫 (正式写手)


kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~!欢迎经常光临小木虫食品版,谢谢~~!
反冲一下,反冲前注意加一个保护柱。然后再加一个保护柱,正相冲洗。如果你每次上样都是过滤过的,同时流动相也都是过滤过的,那么堵塞柱子的应该是蛋白质,采用稀的蛋白酶溶液反复走,使洗脱不了的蛋白质,或者变性的蛋白质水解,从而可以洗出来,柱压会有所下降。如果是杂质堵塞了柱子,那么即使反冲一下,暂时使柱压下降,这根柱子也报废得差不多了。
如果你知道你的上样的样品中的杂质,那么也可采用相应的溶剂冲洗。
最重要的是,前面要加保护柱。
3楼2008-09-02 15:00:46
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)

怎么加保护住?什么样的柱子算是保护住呢?

我的样品和流动相都过滤过的
4楼2008-09-03 12:25:10
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zf851

金虫 (小有名气)


kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~!欢迎经常光临小木虫食品版,谢谢~~!
看样子你用的是凝胶柱啊
1.把柱子拆下来 把机器的管路先洗干净
2.把柱子低速反冲(注意流速 因为柱子的两端通常耐压程度是不同的 反冲时候一定要低流速) 注意判断堵住的物质可能是什么 如果你是柱压高 还没到机子自动停机的压力 找个可溶的溶剂慢慢冲就是了
特别提示:注意凝胶柱的最大压力 因为通常反向柱的耐压程度比 凝胶柱高
5楼2008-09-04 22:50:24
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