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lanlang1002

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】色谱柱堵了,救命啊!!

我用HPLC测蛋白质分子量(pl-aquagel-oh mixed 8um )用缓冲液、水做流动相,没走过有机溶剂,现在是柱压过高,不能正常工作,哪位虫虫知道应该怎么办啊

一根柱子要一万多,要是被老板知道了我就废了!!

[ Last edited by lanlang1002 on 2008-9-2 at 13:11 ]
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syuchenj

金虫 (正式写手)


kidy008(金币+1,VIP+0):热心助人,奖励金币一个,欢迎常顾食品版,谢谢~~!
保护膜柱就可,不一定保护柱,保护膜柱中的保护膜可以反复更换,比较容易。
另外,你是水凝胶柱,最好不要用超声振荡。
如果你的柱子一直用的是缓冲液,而且一直走的是蛋白质,考虑由于蛋白质变性或者沉淀,导致柱压上升,考虑改变离子强度,改变PH,慢慢走。特别是有部分盐溶性蛋白,可以用高离子强度的缓冲液洗涤,部分蛋白,可以采用碱性溶液洗涤(注意柱子的极限PH),最后可以采用酶液缓慢冲洗,浸泡是没有用的。
千万不要用有机溶剂,从你的样品看,十有八九是蛋白沉淀导致柱堵塞。有机溶剂可能使堵塞更严重。
8楼2008-09-09 15:25:36
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syuchenj

金虫 (正式写手)


kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~!欢迎经常光临小木虫食品版,谢谢~~!
反冲一下,反冲前注意加一个保护柱。然后再加一个保护柱,正相冲洗。如果你每次上样都是过滤过的,同时流动相也都是过滤过的,那么堵塞柱子的应该是蛋白质,采用稀的蛋白酶溶液反复走,使洗脱不了的蛋白质,或者变性的蛋白质水解,从而可以洗出来,柱压会有所下降。如果是杂质堵塞了柱子,那么即使反冲一下,暂时使柱压下降,这根柱子也报废得差不多了。
如果你知道你的上样的样品中的杂质,那么也可采用相应的溶剂冲洗。
最重要的是,前面要加保护柱。
3楼2008-09-02 15:00:46
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lanlang1002

新虫 (初入文坛)

怎么加保护住?什么样的柱子算是保护住呢?

我的样品和流动相都过滤过的
4楼2008-09-03 12:25:10
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zf851

金虫 (小有名气)


kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~!欢迎经常光临小木虫食品版,谢谢~~!
看样子你用的是凝胶柱啊
1.把柱子拆下来 把机器的管路先洗干净
2.把柱子低速反冲(注意流速 因为柱子的两端通常耐压程度是不同的 反冲时候一定要低流速) 注意判断堵住的物质可能是什么 如果你是柱压高 还没到机子自动停机的压力 找个可溶的溶剂慢慢冲就是了
特别提示:注意凝胶柱的最大压力 因为通常反向柱的耐压程度比 凝胶柱高
5楼2008-09-04 22:50:24
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