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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lanlang1002

兑换贵宾

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[交流] 【求助】色谱柱堵了,救命啊!!

我用HPLC测蛋白质分子量(pl-aquagel-oh mixed 8um )用缓冲液、水做流动相,没走过有机溶剂,现在是柱压过高,不能正常工作,哪位虫虫知道应该怎么办啊

一根柱子要一万多,要是被老板知道了我就废了!!

[ Last edited by lanlang1002 on 2008-9-2 at 13:11 ]
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lanlang1002

超级版主

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我用缓冲液和水反复走很长时间,没什么效果,反而柱压更高了

可以考虑用酶液洗洗,也有资料说可以把柱子浸泡在酶液中,或过夜,或加超声震荡,不知道这几种方法哪种更合适,有什么不同呢


因为柱子是水凝胶住,从来没做过有机溶剂所以一直走的是水溶液洗

希望会有效!!多谢楼上了,不知道能留个联系方式不,以便更进一步请教
7楼2008-09-09 13:40:19
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syuchenj

管理员

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kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~!欢迎经常光临小木虫食品版,谢谢~~!
反冲一下,反冲前注意加一个保护柱。然后再加一个保护柱,正相冲洗。如果你每次上样都是过滤过的,同时流动相也都是过滤过的,那么堵塞柱子的应该是蛋白质,采用稀的蛋白酶溶液反复走,使洗脱不了的蛋白质,或者变性的蛋白质水解,从而可以洗出来,柱压会有所下降。如果是杂质堵塞了柱子,那么即使反冲一下,暂时使柱压下降,这根柱子也报废得差不多了。
如果你知道你的上样的样品中的杂质,那么也可采用相应的溶剂冲洗。
最重要的是,前面要加保护柱。
3楼2008-09-02 15:00:46
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lanlang1002

实习版主

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怎么加保护住?什么样的柱子算是保护住呢?

我的样品和流动相都过滤过的
4楼2008-09-03 12:25:10
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zf851

超级版主

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kidy008(金币+1,VIP+0):应助奖励~~!欢迎经常光临小木虫食品版,谢谢~~!
看样子你用的是凝胶柱啊
1.把柱子拆下来 把机器的管路先洗干净
2.把柱子低速反冲(注意流速 因为柱子的两端通常耐压程度是不同的 反冲时候一定要低流速) 注意判断堵住的物质可能是什么 如果你是柱压高 还没到机子自动停机的压力 找个可溶的溶剂慢慢冲就是了
特别提示:注意凝胶柱的最大压力 因为通常反向柱的耐压程度比 凝胶柱高
5楼2008-09-04 22:50:24
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