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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Q-RT结果分析，求大神帮助
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寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] Q-RT结果分析，求大神帮助 已有4人参与

小弟初次接触Q-RT，做基因差异表达，结果完全不会分析，也看不懂，求站里各位大神帮助。

Q-RT结果分析，求大神帮助
1.png  这两个基因，据说靶太长太高了，没差异，这个怎么看的，什么是靶？


Q-RT结果分析，求大神帮助-1
2.png 曲线有问题没？据说过了平台期（什么是平台期），27个循环最好？这是没有扩增出来？
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1楼 2015-09-25 10:43:48
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cwdy

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-27 23:08:14
你做的结果误差应该太大了，所以差异没有保证，你看复孔的Ct值是不是差的比较多，另外看溶峰曲线是不是单一峰，这个反映你扩增的特异性。。
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2楼2015-09-25 17:06:17
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218854055

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先上个RUF图和熔解曲线吧，看下数据如何？
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3楼2015-09-26 19:24:03
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寒心季

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 218854055 at 2015-09-26 19:24:03
先上个RUF图和熔解曲线吧，看下数据如何？

熔解曲线图。RUF图是什么？
Q-RT结果分析，求大神帮助-2
3.png
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4楼2015-09-27 18:45:56
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dorecnu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寒心季: 金币+5 2015-09-28 11:08:30
1. 不是靶，是误差bar(erro bar),是以被测量的算术平均值为中点，在表示测量值大小的方向上画出的一个线段，线段长度的一半等于（标准或扩展）不确定度。你的bar这么大，说明测量ct值之间波动很大，不具有统计学意义。
2. 从溶解曲线看引物特异性良好，问题可能出在RT-PCR的其他环节：
新手比较容易犯的错误是：
1. 使用国产重复性差的SYBR green染料
2. 复孔之间引物模板上样量本身存在人为差异
3. 没有熟悉实验原理就开始实验
4. 分析方法错误
请有针对性的解决以上问题后，重复实验！
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5楼2015-09-28 10:00:43
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莫问刀客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

标准差太大！不能说明问题！每个孔加样量不一致，溶解曲线峰值有差异，建议微量加样时，把枪头插到底让它沾在上面。
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输掉过去，赢回未来。
6楼2016-04-25 10:54:02
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