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寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] Q-RT结果分析,求大神帮助 已有4人参与

小弟初次接触Q-RT,做基因差异表达,结果完全不会分析,也看不懂,求站里各位大神帮助。

Q-RT结果分析,求大神帮助
1.png  这两个基因,据说靶太长太高了,没差异,这个怎么看的,什么是靶?


Q-RT结果分析,求大神帮助-1
2.png 曲线有问题没?据说过了平台期(什么是平台期),27个循环最好?这是没有扩增出来?
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cwdy

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-27 23:08:14
你做的结果误差应该太大了,所以差异没有保证,你看复孔的Ct值是不是差的比较多,另外看溶峰曲线是不是单一峰,这个反映你扩增的特异性。。
2楼2015-09-25 17:06:17
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218854055

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先上个RUF图和熔解曲线吧,看下数据如何?
3楼2015-09-26 19:24:03
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寒心季

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 218854055 at 2015-09-26 19:24:03
先上个RUF图和熔解曲线吧,看下数据如何?

熔解曲线图。RUF图是什么?
Q-RT结果分析,求大神帮助-2
3.png

4楼2015-09-27 18:45:56
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dorecnu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
寒心季: 金币+5 2015-09-28 11:08:30
1. 不是靶,是误差bar(erro bar),是以被测量的算术平均值为中点,在表示测量值大小的方向上画出的一个线段,线段长度的一半等于(标准或扩展)不确定度。你的bar这么大,说明测量ct值之间波动很大,不具有统计学意义。
2. 从溶解曲线看引物特异性良好,问题可能出在RT-PCR的其他环节:
新手比较容易犯的错误是:
1. 使用国产重复性差的SYBR green染料
2. 复孔之间引物模板上样量本身存在人为差异
3. 没有熟悉实验原理就开始实验
4. 分析方法错误
请有针对性的解决以上问题后,重复实验!
5楼2015-09-28 10:00:43
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莫问刀客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

标准差太大!不能说明问题!每个孔加样量不一致,溶解曲线峰值有差异,建议微量加样时,把枪头插到底让它沾在上面。
输掉过去,赢回未来。
6楼2016-04-25 10:54:02
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