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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 放线菌发酵过程中pH出现的问题，求解答！
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yc652090251

金虫 (小有名气)

[求助] 放线菌发酵过程中pH出现的问题，求解答！ 已有2人参与

在一株放线菌发酵过程中，移种入发酵罐后前20小时左右pH下降至最低点，随后升高（未达到发酵产物产生最佳pH）。
     那么问题来了，在未达到产物生产最佳pH时，pH又开始下降，而且较长时间（8h）未见升高趋势。
     请各位发酵大神帮忙解释一下这种现象的产生原因。
     怀疑溶氧不足：将转速和通气提高至正常发酵要求工艺参数以上，未见好转。求分析！
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低调做人好么~~
1楼 2015-09-23 18:21:00
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chshen06188

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yc652090251: 金币+1, ★有帮助, 已检测过未染菌 2015-09-23 21:04:40
首先做一下杂菌检测，确定是否有污染的情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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竹杖芒鞋轻胜马，一蓑风雨任平生。
2楼2015-09-23 20:22:02
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yc652090251: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-09-24 23:53:00
加淀粉或者加糖太多了
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3楼2015-09-24 08:47:11
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yc652090251

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wt3532 at 2015-09-24 08:47:11
加淀粉或者加糖太多了

G是加的多了，可是以前也是加这些，也没有出现这种情况，减少糖的含量能避免这种现象么？
另外问一下，培养基中用糖化淀粉替换G，可以通过淀粉的糖化程度来控制还原糖的含量么？
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低调做人好么~~
4楼2015-09-24 23:52:38
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yc652090251: 金币+10, ★★★很有帮助, 好详细，谢谢！ 2015-09-25 21:23:12
引用回帖:
4楼: Originally posted by yc652090251 at 2015-09-24 23:52:38
G是加的多了，可是以前也是加这些，也没有出现这种情况，减少糖的含量能避免这种现象么？
另外问一下，培养基中用糖化淀粉替换G，可以通过淀粉的糖化程度来控制还原糖的含量么？...

氮源过多,会使菌体生长过于旺盛,pH偏高,不利于代谢产物的积累,氮源不足,则菌体繁殖量少,从而影响产量.碳源过多,则容易形成较低的pH,若碳源不足,易引起菌体衰老和自溶.

我个人认为初始培养基加的葡萄糖只是在放线菌没有生长起来时为了大量增殖菌体，采用容易利用的糖。糖加多了后，生长有机酸增多，如果没有pH调节，可能pH就不适合菌的生长了。
当菌体生长起来后，可以分泌酶分解淀粉，生成单糖，缓慢利用葡萄糖。当利用大量葡萄糖时，pH下降，当利用产生的有机酸或者利用氮源时，pH均会上升。最后利用淀粉时，持续缓慢释放葡萄糖，可能不会产生较多有机酸，之后就看菌体产酸能力强还是利用氮源能力强了。所以pH可能会有小幅波动，当最终C源用完，光剩氮源了，可能pH就会一路上漂。

所以，pH的变化可能是这样的
首先，接种后pH会持续一段时间不怎么变化或者小幅度降低
然后，pH迅速下降，接着菌体生长速度快，DO降低明显
然后，几个小时之后，pH会上升较大幅度，之后，维持pH或者较小幅度的上下波动，估计你的产物（可能是次级代谢产物）就是那个阶段合成的。
最后，pH持续上升，估计是碳源消耗完毕，然后可以放罐了。

你之前是否葡萄糖或者氮源成分或者来源上换掉了。
也有可能是你的菌种生长状态不好，菌种过老。
或者你的葡萄糖灭菌时不是单独灭菌。
或者是葡萄糖是不是称错了。
这些都有可能。

培养基中糖化淀粉代替G，应该是可以的，但是还是建议加大淀粉比例，G比例减少但不要一点有没有，G少可能会导致你的发酵周期延长。可能又要熬夜守罐子了。

祝顺利
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5楼2015-09-25 02:05:53
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yc652090251

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wt3532 at 2015-09-25 02:05:53
氮源过多,会使菌体生长过于旺盛,pH偏高,不利于代谢产物的积累,氮源不足,则菌体繁殖量少,从而影响产量.碳源过多,则容易形成较低的pH,若碳源不足,易引起菌体衰老和自溶.

我个人认为初始培养基加的葡萄糖只是在放线 ...

正常情况整体的pH变化过程是前期pH迅速下降，菌体快速生长，待pH降至最低（菌体不在增加）后pH开始回升，至稳定后开始产生次级代谢产物（目的产物）。
G是单独灭菌的，称量的应该不会错（灭菌后总糖和还原糖的含量检测结果正常），所以应该是G的配比偏高了，菌种斜面有些老化的原因。
我现在想把G含量降低，像你说的，G不被淀粉全部替换。那么在发酵培养基中，C源加入了淀粉，总糖含量会升高，还原糖控制保持在一定程度，那么N源含量是否有必要调整呢？
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低调做人好么~~
6楼2015-09-25 21:55:40
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧
引用回帖:
6楼: Originally posted by yc652090251 at 2015-09-25 21:55:40
正常情况整体的pH变化过程是前期pH迅速下降，菌体快速生长，待pH降至最低（菌体不在增加）后pH开始回升，至稳定后开始产生次级代谢产物（目的产物）。
G是单独灭菌的，称量的应该不会错（灭菌后总糖和还原糖的含量 ...

你还是做实验验证下吧，淀粉的含量多少我估计影响不是很大，因为淀粉水解很慢，所以淀粉可以认为是一种缓释的少量的葡萄糖。把葡萄糖量降下来，或者葡萄糖量不变，等葡萄糖耗尽后，拿氨水或者别的什么碱性物质将pH调节到你发酵表达产物的正常pH看看。
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7楼2015-09-27 08:22:25
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yc652090251

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wt3532 at 2015-09-27 08:22:25
你还是做实验验证下吧，淀粉的含量多少我估计影响不是很大，因为淀粉水解很慢，所以淀粉可以认为是一种缓释的少量的葡萄糖。把葡萄糖量降下来，或者葡萄糖量不变，等葡萄糖耗尽后，拿氨水或者别的什么碱性物质将pH ...

好的，非常感谢！
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低调做人好么~~
8楼2015-09-27 10:20:15
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