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xdcindy81

铜虫 (小有名气)

[交流] 电泳图求助

最近从鱼的肝脏中提取了少量DNA,在冰箱中放了4天后跑电泳,图像很奇怪!!希望大家帮忙给解释一下,多谢!!!
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
放在多少摄氏度的冰箱?4还是-20?
提取完后加RNase了么?
研磨或者匀浆太剧烈导致DNA片段化严重的可能性比较大。
轻柔一些

[ Last edited by brightfuture01 on 2008-9-1 at 10:47 ]
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2008-09-01 10:45:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
降解得厉害
可能是提的时候纯度不高
另外是放4度冰箱还是-20度呢?
纯度不高+放4度降解成这样其实很正常……

这是提取的时候的操作问题吧,另外提取所用的试剂、耗材都要是无菌的,否则很麻烦
3楼2008-09-01 10:46:36
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hnnuwl

新虫 (正式写手)

讨论后得到

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
拖带是由于DNA降解
出现锯齿状是由于点样孔太差了
另外你的样品也不好
点样孔就有很多杂质
4楼2008-09-01 10:49:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
点样孔看起来发亮其实还有可能是跑不进胶
1、buffer的缓冲能力不够,我试过用0.5*TBE的跑PAGE,很难进去,因为0.5*适用于琼脂糖,PAGE要1*才够
2、胶太浓,跑基因组用0.5%~0.8%的跑吧~用1%就很难跑动了,虽然还是能跑
5楼2008-09-01 10:58:51
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xdcindy81

铜虫 (小有名气)

应该是

我是放在4度的冰箱,大家分析得都有一定道理;
多谢了
6楼2008-09-01 17:32:29
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

降解了!!
细推物理须行乐。
7楼2008-09-01 20:40:20
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

另外点样是飘出来小部分!!
细推物理须行乐。
8楼2008-09-01 20:41:37
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)

离子浓度强了
9楼2008-09-02 07:08:26
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
不管加还是没有加RNA酶,2h的电泳足以将RNA泳出胶了。
看来主要是胶的浓度的问题,造成胶孔有DNA滞留,也可能是有蛋白没有抽提彻底。不知道你提取DNA的方法是什么?传统的方法还是试剂盒??
一般来说在冰箱中放置4天,不管是4度还是-20度,都不会有大的问题,只要抽提彻底的话,DNA还是相对稳定地多。
可以换用0.5%的胶在跑跑看,电泳时间也太长了一些。
位卑未敢忘忧国。
10楼2008-09-02 08:02:12
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