应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于两个基因如何共表达的问题！求赐教！⊙﹏⊙
101/1返回列表
查看: 2130  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1993zx

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于两个基因如何共表达的问题！求赐教！⊙﹏⊙ 已有3人参与

嗯，首先呢，我是研一狗，目前处于查文献写开题中，理论思路是这样的，用腺病毒载体共表达两个基因，在第一个目的基因已经插入的情况下，如何表达第二个基因(当佐剂的细胞因子)?我有看到文献是通过同源重组，把线性化后的质粒与回收的第二个基因通过EZ重组试剂盒连接，可行吗?还有没有其他方法，谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-09-23 12:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-23 22:47:03
你就是要用腺病毒载体表达两个基因？是什么基因？表达蛋白的？
这事还不简单，你要么通过IRES带上第二个基因的CDS（效率低一点），或者另起，找个空白地方装入另一个promoter-GOI-polyA signal。
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-23 13:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1993zx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-23 13:58:20
你就是要用腺病毒载体表达两个基因？是什么基因？表达蛋白的？
这事还不简单，你要么通过IRES带上第二个基因的CDS（效率低一点），或者另起，找个空白地方装入另一个promoter-GOI-polyA signal。

嗯，其中一个是病毒的结构蛋白，另外一个是动物的细胞因子,用来增强免疫原性的，那如果IRES表达效率低的话，有没有什么方法改进啊，谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-23 14:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lchxs465

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-23 22:47:23
本帖内容被屏蔽
4楼2015-09-23 17:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1993zx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lchxs465 at 2015-09-23 17:21:04
可以质粒共转化啊，用两个不同的质粒（注意复制子要不同）分别插入两个基因，共转化到一个细胞中立刻，这样比较方便

比如另外一个基因插入普通真核质粒?pVAX?

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-23 17:52:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by lchxs465 at 2015-09-23 17:21:04
可以质粒共转化啊，用两个不同的质粒（注意复制子要不同）分别插入两个基因，共转化到一个细胞中立刻，这样比较方便

他是在整腺病毒，是在转染或者感染！
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-23 21:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞奔的大象

新虫 (小有名气)
建议另做框架，选好启动子，2型和3型，是不是加终止信号。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-23 23:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如1楼同志所说，可以使用以下方法之一：
1、使用IRES序列，即在第一个基因的终止密码子之后polyA之前插入IRES序列及第二个基因完整的CDS即可；
2、使用2A序列，即在第一个基因的的终止密码子之前插入2A序列并插入第二个基因的完整CDS，期间注意读码框正确；
3、增加完整表达框，即在第一个基因的polyA之后，插入启动子-基因2-polyA结构（可以是从别的质粒上直接扒下来）。

增加的方法推荐同源重组法，简单快捷粗暴有效。。或者你喜欢普通的酶切-连接法也可以。
金币交出来。。
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-24 01:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1993zx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-09-24 01:11:21
如1楼同志所说，可以使用以下方法之一：
1、使用IRES序列，即在第一个基因的终止密码子之后polyA之前插入IRES序列及第二个基因完整的CDS即可；
2、使用2A序列，即在第一个基因的的终止密码子之前插入2A序列并插入 ...

同源重组就线性化质粒，用试剂盒直接和另外基因连接吗?

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-24 10:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 1993zx at 2015-09-24 10:34:13
同源重组就线性化质粒，用试剂盒直接和另外基因连接吗?
...

是，只是你PCR设计引物的时候两端带上20bp左右的同源臂。详见说明书，随便搜一家的“无缝克隆”。
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-24 13:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1993zx 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 oepdf5z972 2026-06-20 3/150 2026-06-21 21:01 by zo4669e5n4
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望？ +7 布布和一二 2026-06-17 9/450 2026-06-21 19:29 by 布布和一二
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 19:18 by q1p9ixelzp
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭