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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于两个基因如何共表达的问题！求赐教！⊙﹏⊙
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1993zx

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于两个基因如何共表达的问题！求赐教！⊙﹏⊙ 已有3人参与

嗯，首先呢，我是研一狗，目前处于查文献写开题中，理论思路是这样的，用腺病毒载体共表达两个基因，在第一个目的基因已经插入的情况下，如何表达第二个基因(当佐剂的细胞因子)?我有看到文献是通过同源重组，把线性化后的质粒与回收的第二个基因通过EZ重组试剂盒连接，可行吗?还有没有其他方法，谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-09-23 12:59:57
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 1993zx at 2015-09-24 10:34:13
同源重组就线性化质粒，用试剂盒直接和另外基因连接吗?
...

是，只是你PCR设计引物的时候两端带上20bp左右的同源臂。详见说明书，随便搜一家的“无缝克隆”。
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10楼2015-09-24 13:45:48
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-23 22:47:03
你就是要用腺病毒载体表达两个基因？是什么基因？表达蛋白的？
这事还不简单，你要么通过IRES带上第二个基因的CDS（效率低一点），或者另起，找个空白地方装入另一个promoter-GOI-polyA signal。
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2楼2015-09-23 13:58:20
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1993zx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-23 13:58:20
你就是要用腺病毒载体表达两个基因？是什么基因？表达蛋白的？
这事还不简单，你要么通过IRES带上第二个基因的CDS（效率低一点），或者另起，找个空白地方装入另一个promoter-GOI-polyA signal。

嗯，其中一个是病毒的结构蛋白，另外一个是动物的细胞因子,用来增强免疫原性的，那如果IRES表达效率低的话，有没有什么方法改进啊，谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-09-23 14:22:01
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lchxs465

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-23 22:47:23
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4楼2015-09-23 17:21:04
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