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巴山夜雨YJ

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞培养的问题 已有3人参与

1.每次显微镜观察培养瓶细胞时(贴壁),都不是很清楚,就是若影若现的感觉,焦距和光亮度怎么调都不是很清楚,但是每次一加消化液观察时就很清楚,悬浮的细胞也看的很清楚,这是什么情况呢?
2.每次消化都要好几分钟,时间较长,而且吹打好久,瓶底还是有好多贴壁细胞?是因为消化液的效果不行吗?还是。。。
由于本人才刚踏入细胞的圈子,好多很低级的问题想不清楚,希望虫友们给我点建议,谢谢你们帮助啦!!!
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wdw989

新虫 (正式写手)

2楼2015-09-22 17:47:15
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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巴山夜雨YJ: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 11:33:21
可能你的细胞过于密了,消化的时候,你可以试试分次消化,在37度孵育下,可能效果会好点
3楼2015-09-23 09:11:20
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巴山夜雨YJ

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-09-23 06:11:20
可能你的细胞过于密了,消化的时候,你可以试试分次消化,在37度孵育下,可能效果会好点

分次消化时什么意思,就是我先消化掉一部分,剩下的等长长再消化一次是吗?
通常传代说一传二,是分到两个新瓶?还是旧瓶也可以用,再分一瓶到新瓶呢?
4楼2015-09-23 11:33:13
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zhangshuman

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
巴山夜雨YJ: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-10-05 18:13:13
一传二就是一半丢回旧瓶子,一半传到新瓶子。一般一个培养瓶反复用是没问题的。如果半个月以上可以考虑换瓶子,因为瓶底的蛋白少了不利于细胞贴壁。细胞看起来模糊我遇到过从培养箱刚拿出到室温温度变化,瓶面会有雾气,不知道是不是这个原因。

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-09-23 16:12:25
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 巴山夜雨YJ at 2015-09-23 11:33:13
分次消化时什么意思,就是我先消化掉一部分,剩下的等长长再消化一次是吗?
通常传代说一传二,是分到两个新瓶?还是旧瓶也可以用,再分一瓶到新瓶呢?...

分次消化是第一次消化好,终止消化,倒出来,清洗下培养瓶,再加入胰酶进行第二次消化
传代的时候,旧瓶也是可以继续利用的
6楼2015-09-23 16:17:22
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郭冠霖

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
巴山夜雨YJ: 金币+1, 有帮助 2015-10-05 18:15:09
第一个问题过于奇葩解释不了。第二个问题用标准的消化方法是抽掉旧培养基。加入每平方厘米0.25ml pbs 然后吸出加胰酶1ml铺满然后吸出。37 度5分钟。加培养基3-5ml 前后左右缓慢摇匀。放到培养箱就好了

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-09-24 13:17:55
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