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puma2003铁杆木虫 (著名写手)
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sds-page浓缩胶 不能浓缩
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SDS-page 浓缩胶压缩不好，以前跑的时候 能成一条细线的，但现在老是粗粗的一条，不知道怎么回事，所有的试剂我都重新配了，不知道还有什么可能产生影响的因素？郁闷啊 我用的是索莱宝的marker 上样5微升，也是不能压成一条细线 这到底是怎么回事呢 |
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qgaoamtf
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电压、电流是否稳定？ 或参考：http://www.helixnet.cn/thread-9330-1-1.html  [ Last edited by qgaoamtf on 2008-8-31 at 21:51 ] |
2楼2008-08-31 20:55:51
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puma2003
铁杆木虫 (著名写手)
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司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:44
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在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。 |
10楼2008-09-08 12:49:16