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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sds-page浓缩胶 不能浓缩
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] sds-page浓缩胶 不能浓缩

SDS-page 浓缩胶压缩不好，以前跑的时候 能成一条细线的，但现在老是粗粗的一条，不知道怎么回事，所有的试剂我都重新配了，不知道还有什么可能产生影响的因素？郁闷啊
我用的是索莱宝的marker 上样5微升，也是不能压成一条细线
这到底是怎么回事呢
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1楼 2008-08-31 20:47:03
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
电压、电流是否稳定？
或参考：http://www.helixnet.cn/thread-9330-1-1.html


[ Last edited by qgaoamtf on 2008-8-31 at 21:51 ]
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2楼2008-08-31 20:55:51
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qfzhang

银虫 (小有名气)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复
1 溴酚蓝太多了
2 用异丙醇压胶，试试
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3楼2008-09-01 10:35:53
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zyk_527

银虫 (小有名气)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复
丙烯酰胺粉末换新的，绝对可以
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4楼2008-09-01 21:41:28
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jasminesj

铜虫 (小有名气)
浓缩胶的pH调整一下试试
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5楼2008-09-02 09:36:13
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zwlcxx

银虫 (小有名气)
你看看是不是电泳槽不密封，或者缓冲液的ph有没有改变，或者再加养之前处理时有差错？
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6楼2008-09-02 14:40:38
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-9-1 21:41:
丙烯酰胺粉末换新的，绝对可以

换用过别人的储液，都没有用
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7楼2008-09-02 16:56:59
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blizzard1506

1单双体不是同一公司的，
2换个上样缓冲液试试。
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8楼2008-09-07 17:32:40
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)
经验：重新配置AP！！
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9楼2008-09-07 20:19:33
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panfanbin

金虫 (初入文坛)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:44
在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
　　所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。
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10楼2008-09-08 12:49:16
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