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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 配了一个PCR mix，当天有结果，放-20度几天之后，不能用了？
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liyueyue

铁虫 (正式写手)

[交流] 配了一个PCR mix，当天有结果，放-20度几天之后，不能用了？

最近PCR遇到一个奇怪的问题，哪位帮我分析一下，不胜感激：
因为每次PCR都要用到5*PCR buffer， 25mM MgCl2和10mM dNTP，所以配了一个400倍反应体系的mix，当天配完后，这个mix是好用的。然后我就把它存放在冰箱了（这个mix中没放taq酶）。可是几天后，用相同的模板，PCR仪，PCR程序，扩了40多个样本，结果只有一个样本有条带。我感觉PCR buffer， MgCl2和dNTP这三个混到一起不容易出问题,完全可以配个mix储存起来。是哪里出问题了啊？
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1楼 2015-09-22 10:20:54
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renzhiq

木虫 (小有名气)
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liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:47
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2015-09-23 04:05:16
400倍，可能吗？配好放2-8度。

他应该想表达的是400倍反应体积，50ul*400

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8楼2015-09-23 07:46:30
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)
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liyueyue: 金币+10 2016-01-15 12:38:47
我配1x，放-20℃，一个月都没问题。
应该不是其中某一个试剂的原因，因为有一个样本扩出来了。
推测：1.是否是配置后液体不均匀，或者复融后没有振荡混匀所致。2.是否是DNA有问题？3.如果某些不好扩增的序列，或者引物不好，现配的mix效率更高
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偶时晴天偶时雨
13楼2015-09-23 23:17:27
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普通回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:15:17
liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:13
估计是dNTP失效了，dNTP在低浓度时易失效，反复冻融会加速该过程。
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2楼2015-09-22 20:40:15
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ljqpyk
3楼2015-09-22 21:17:21
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547star

木虫 (著名写手)
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liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:26
400倍，可能吗？配好放2-8度。
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为什么
4楼2015-09-23 04:05:16
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
路过的看了一下，帮顶，祝福你好运！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
5楼2015-09-23 06:55:47
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
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专业做mix的技术，路过，笑而不语

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6楼2015-09-23 06:59:11
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renzhiq

木虫 (小有名气)
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liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:42
你这个现象确实有点奇怪，如果说某种成分变了，应该所有的都扩增不出来，可你又有一个扩增出来了。奇怪……
我以前也会自己配mix，并且我从来都是把Taq酶也加进去的，但从来没有遇到过这种情况。
请问你储存在4℃还是-20℃？我存放在4℃，如果说你存放在-20℃，有不有可能是没有完全融化？导致这种结果？

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7楼2015-09-23 07:42:32
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asked6188

木虫 (职业作家)
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liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:51
反复冻融dNTP会降解
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9楼2015-09-23 08:40:32
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zergbloody

铁虫 (正式写手)
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liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:55
我连酶都是放在四度的 放个半年一年都可以用 没问题的

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10楼2015-09-23 21:12:35
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