24小时热门版块排行榜    

查看: 5370  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liyueyue

铁虫 (正式写手)

[交流] 配了一个PCR mix,当天有结果,放-20度几天之后,不能用了?

最近PCR遇到一个奇怪的问题,哪位帮我分析一下,不胜感激:
因为每次PCR都要用到5*PCR buffer, 25mM MgCl2和10mM dNTP,所以配了一个400倍反应体系的mix,当天配完后,这个mix是好用的。然后我就把它存放在冰箱了(这个mix中没放taq酶)。可是几天后,用相同的模板,PCR仪,PCR程序,扩了40多个样本,结果只有一个样本有条带。我感觉PCR buffer, MgCl2和dNTP这三个混到一起不容易出问题,完全可以配个mix储存起来。是哪里出问题了啊?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asked6188

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:51
反复冻融dNTP会降解
9楼2015-09-23 08:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:15:17
liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:13
估计是dNTP失效了,dNTP在低浓度时易失效,反复冻融会加速该过程。
2楼2015-09-22 20:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liyueyue: 金币+5 2016-01-15 12:39:26
400倍,可能吗?配好放2-8度。
为什么
4楼2015-09-23 04:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)

路过的看了一下,帮顶,祝福你好运!~~~~~~~~~~~~~~~~~~
自强不息,厚德载物;独立精神,自由思想。
5楼2015-09-23 06:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见