24小时热门版块排行榜    

查看: 824  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

olivelmint

[交流] 关于真菌菌丝DNA的提取方法!

大家好,小弟最近遇到一个提DNA的问题!我参见的是国外的一篇文献的方法:采取的冻融的方法。

1 刮取菌丝,悬浮于装有100微升无菌水微试管中;

2 -70°超低温冰箱冷冻3分钟(文献上是干冰上冻3分钟)

3 100°水浴融化,涡旋2分钟(文献上是75°融化)

4 重复3次冻融循环,最后一次融化时间15分钟

5 15700转下,离心5分钟

6 吸取6.25微升上清作PCR模板

结果是:我做了3次试验,可是电泳的结果是没有目标条带出现,之前用别的方法提取DNA,条带可以看见,不知道为什么用文献上的方法就是提取不出来呢?

由于第一步从平板上刮菌丝会携带一部分琼脂,所以在第一步结束厚我先是用沸水煮了一下,然后转了一个微试管,目的是避免琼脂最后的干扰

高手们,帮我看看我是哪出了问题?关键是目前不知道这种方法DNA有没有提取出来!按理说,文献上的方法应该是可行的啊?谢谢指点!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

另外这个转速会不会太高了……不知道上清里头会不会有DNA哦
100℃的水浴DNA也容易降解的说
(99℃处理个几分钟热变性,DNA都降解得厉害~~)
3楼2008-08-29 15:14:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):感谢答复,两个帖子一起评了
1、不要vortex,DNA严重断裂。就算要vortex也不要超过5s
2、离心时要4℃离心

为什么不用经典的酚-氯仿法抽提呢?
2楼2008-08-29 15:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

olivelmint

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-8-29 15:09:
1、不要vortex,DNA严重断裂。就算要vortex也不要超过5s
2、离心时要4℃离心

为什么不用经典的酚-氯仿法抽提呢?

您好,感谢你的回复!关键是外文文献上用的这个方法,觉得比常规的方法要省时,而且是纯物理反映,不用加任何的试剂。我基本和它的步骤一样,就是冷冻我用-70°,融化我用100°的,它DNA讲解有这么快吗?要不再按它的方法温柔一点?
4楼2008-08-29 15:35:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

其实DNA很怕物理因素的干扰的
我要提大片段,连枪头的尖端都要剪断,这样吸取的时候就不会有物理的切割因素存在
5楼2008-08-29 16:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见