应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于原核表达包涵体纯化的问题？
51/1返回列表
查看: 2000  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

王希lily

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助关于原核表达包涵体纯化的问题？ 已有5人参与

本人是新手，最近在做原核表达，表达载体为PET32，做到蛋白纯化时，优化条件后发现蛋白老是表达在沉淀中，所以需用尿素将包涵体溶解挂柱纯化，但做到包涵体洗涤液（含2M尿素）洗涤时发现蛋白变成胶冻状，根本没办法继续用8M尿素溶解，更不用说上柱纯化了，我将包涵体洗涤液洗涤的上清跑SDS-PAGE，发现有少部分目的条带。之后我又直接用8M尿素溶解，上清跑SDS-PAGE，发现几乎没有目的条带。急求哪位大神能给点意见，为什么包涵体洗涤液会将蛋白洗成胶冻状？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-09-14 10:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王希lily

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-14 14:46:22
可以尝试用用6M盐酸胍,可尝试加少量EDTA .试试先不行在讨论。另外也可以尝试低温诱导，比如25度，尝试让其可溶性表达。

嗯，我做优化的时候做了20度的，几乎都表达在沉淀呢，所以只有想办法溶包涵体了，我试试盐酸胍呢，谢谢了
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-14 16:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

hc-material

专家顾问 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-14 23:07:38
可以尝试用用6M盐酸胍,可尝试加少量EDTA .试试先不行在讨论。另外也可以尝试低温诱导，比如25度，尝试让其可溶性表达。
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-14 14:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-14 23:08:16
本帖内容被屏蔽
4楼2015-09-14 22:17:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王希lily

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-09-14 22:17:31
这种情况我也出现过，2M尿素就变成胶冻状吗？看来应该很好复性的。建议：1.使用Benzonase代替超声，如果非用超声建议频率调低，时间缩短。2.可以直接用6M尿素溶解，过柱纯化，纯化之后再复性。3.如果6M尿素不能溶解 ...

好的，我试试，谢谢

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
5楼2015-09-15 00:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +6 Isak0320 2026-10-12 8/400 2026-10-12 20:09 by caixiaoye1
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭