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shxteacher铁杆木虫 (正式写手)
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[交流]
关于NTA-Ni纯化带有Flag标签的融合蛋白
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本人今天实验发现一个奇怪的现象： 我讲带有Flag标签的融合蛋白的细胞裂解液过NTA-Ni的重力柱，然后用1xBinding buffer洗柱子（15倍柱体积），然后直接用1xStrip buffer（主要成分是EDTA溶液），并且收集1xStrip buffer的洗脱液（1倍柱体积），然后跑SDS-PAGE，发现存在一个比较纯的而且是带有Flag标签的目的蛋白。 说明：目的蛋白仅带有Flag标签，不带有His标签。 我很疑惑：难道Flag标签的融合蛋白也可以吸附在NTA-Ni重力柱？ Flag tag的蛋白序列：DYKDDDDK His tag的蛋白质序列：HHHHHH 我在怀疑是不是Flag标签中含有较多的天冬氨酸，也可以螯合Ni？ 不知道有木有科研同仁遇到这样的情况？ |
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