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猫薄荷9143

新虫 (初入文坛)

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[求助] 定量PCR内参选择的困惑

最近要扩增一个RNA病毒其中一个蛋白的基因，看不同时间该基因的变化量，之前师兄们说病毒没有内参所以只能做绝对定量，但是最近查了查发现有人说如果用A细胞感染的病毒，就用A细胞所在物种的内参基因就行。
但是迷茫的是，
第一，细胞感染过病毒之后肯定会有死细胞，死细胞还表达内参基因吗？如果不表达的话这个内参就不准确了吧？
第二，我想分开提取感染后上清和细胞，离心后收集上清弃去细胞再提取RNA转cDNA做荧光，那么这里面就不包括任何细胞了呀，还表达内参吗？
第三，可不可以不要内参呢？因为每组细胞数差不多是一样的（计数后反复吹打依次加入培养板），接毒量也是一样的。

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