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定量PCR内参选择的困惑
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最近要扩增一个RNA病毒其中一个蛋白的基因,看不同时间该基因的变化量,之前师兄们说病毒没有内参所以只能做绝对定量,但是最近查了查发现有人说如果用A细胞感染的病毒,就用A细胞所在物种的内参基因就行。 但是迷茫的是, 第一,细胞感染过病毒之后肯定会有死细胞,死细胞还表达内参基因吗?如果不表达的话这个内参就不准确了吧? 第二,我想分开提取感染后上清和细胞,离心后收集上清弃去细胞再提取RNA转cDNA做荧光,那么这里面就不包括任何细胞了呀,还表达内参吗? 第三,可不可以不要内参呢?因为每组细胞数差不多是一样的(计数后反复吹打依次加入培养板),接毒量也是一样的。 |
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