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黎花梦香

新虫 (初入文坛)

[求助] 将细胞接种到96孔板贴壁后，怎么将96孔板中的细胞消化下来 已有3人参与

将细胞铺于96孔板，并培养贴壁后，怎么将96孔板中的细胞消化下来，我想给药之后将细胞破碎，再进行下步实验的，能告诉我具体步骤吗？
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1楼 2015-09-10 10:13:16
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evangelina

无虫 (小有名气)
★ ★
黎花梦香(wizardfan代发): 金币+2, 感谢应助 2015-09-12 10:41:30
引用回帖:
5楼: Originally posted by 黎花梦香 at 2015-09-10 16:16:00
那胰酶加多少呢？
消化时间和在培养瓶中的消化时间应该有所不同吧？
消化好后是用枪吹细胞吗？
因为这时候细胞是否吹起光看外表应该不好判断吧，那应该怎么判断呢？
用来中和加的血清又加多少呢？...

我没有做过96孔的，因为觉得自己的手没那么灵巧，我做过最小是48孔的
48孔养细胞放300ul培养液，洗PBS一样300ul两次，胰酶100ul，消化时间要在显微镜下判断
既然你只需要收集细胞，胰酶处理过了点也没什么问题
然后再加200ul培养液去中和胰酶
再就直接用枪打下来吸走，从不同方向上下吹十来次，应该大部分都下来了
96孔应该要更少吧
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6楼2015-09-10 16:30:08
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黎花梦香: 金币+6, ★★★很有帮助 2015-09-11 09:44:59
一样的，把培养液拿掉，放PBS洗一两次，加胰酶，然后用带血清的培养液中和
不过所有容积都要酌量减少，而且因为孔之间很近，容易污染
如果你是准备跑蛋白应该还可以，如果准备提RNA，我就劝你放弃吧
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2楼2015-09-10 10:54:31
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黎花梦香: 金币+2, ★有帮助 2015-09-11 09:45:13
换掉培养液，蝗虫也洗2次，胰蛋白酶消化，你要给药之后再破碎蛋白？你是做细胞瞬时转染吗，你说的给药是压力筛选吗，你要是想检测蛋白，直接破碎即可，不需给药了~
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3楼2015-09-10 14:46:14
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黎花梦香

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by MarchZR at 2015-09-10 14:46:14
换掉培养液，蝗虫也洗2次，胰蛋白酶消化，你要给药之后再破碎蛋白？你是做细胞瞬时转染吗，你说的给药是压力筛选吗，你要是想检测蛋白，直接破碎即可，不需给药了~...

不再给药了，只需将细胞破碎就行，那是直接用枪将孔里消化中和后的液体吸出吗？
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4楼2015-09-10 16:11:09
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