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黎花梦香

新虫 (初入文坛)

[求助] 将细胞接种到96孔板贴壁后,怎么将96孔板中的细胞消化下来 已有3人参与

将细胞铺于96孔板,并培养贴壁后,怎么将96孔板中的细胞消化下来,我想给药之后将细胞破碎,再进行下步实验的,能告诉我具体步骤吗?
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黎花梦香: 金币+6, ★★★很有帮助 2015-09-11 09:44:59
一样的,把培养液拿掉,放PBS洗一两次,加胰酶,然后用带血清的培养液中和
不过所有容积都要酌量减少,而且因为孔之间很近,容易污染
如果你是准备跑蛋白应该还可以,如果准备提RNA,我就劝你放弃吧
2楼2015-09-10 10:54:31
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黎花梦香: 金币+2, 有帮助 2015-09-11 09:45:13
换掉培养液,蝗虫也洗2次,胰蛋白酶消化,你要给药之后再破碎蛋白?你是做细胞瞬时转染吗,你说的给药是压力筛选吗,你要是想检测蛋白,直接破碎即可,不需给药了~
3楼2015-09-10 14:46:14
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黎花梦香

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by MarchZR at 2015-09-10 14:46:14
换掉培养液,蝗虫也洗2次,胰蛋白酶消化,你要给药之后再破碎蛋白?你是做细胞瞬时转染吗,你说的给药是压力筛选吗,你要是想检测蛋白,直接破碎即可,不需给药了~...

不再给药了,只需将细胞破碎就行,那是直接用枪将孔里消化中和后的液体吸出吗?
4楼2015-09-10 16:11:09
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黎花梦香

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-10 10:54:31
一样的,把培养液拿掉,放PBS洗一两次,加胰酶,然后用带血清的培养液中和
不过所有容积都要酌量减少,而且因为孔之间很近,容易污染
如果你是准备跑蛋白应该还可以,如果准备提RNA,我就劝你放弃吧

那胰酶加多少呢?
消化时间和在培养瓶中的消化时间应该有所不同吧?
消化好后是用枪吹细胞吗?
因为这时候细胞是否吹起光看外表应该不好判断吧,那应该怎么判断呢?
用来中和加的血清又加多少呢?
5楼2015-09-10 16:16:00
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evangelina

无虫 (小有名气)

★ ★
黎花梦香(wizardfan代发): 金币+2, 感谢应助 2015-09-12 10:41:30
引用回帖:
5楼: Originally posted by 黎花梦香 at 2015-09-10 16:16:00
那胰酶加多少呢?
消化时间和在培养瓶中的消化时间应该有所不同吧?
消化好后是用枪吹细胞吗?
因为这时候细胞是否吹起光看外表应该不好判断吧,那应该怎么判断呢?
用来中和加的血清又加多少呢?...

我没有做过96孔的,因为觉得自己的手没那么灵巧,我做过最小是48孔的
48孔养细胞放300ul培养液,洗PBS一样300ul两次,胰酶100ul,消化时间要在显微镜下判断
既然你只需要收集细胞,胰酶处理过了点也没什么问题
然后再加200ul培养液去中和胰酶
再就直接用枪打下来吸走,从不同方向上下吹十来次,应该大部分都下来了
96孔应该要更少吧
6楼2015-09-10 16:30:08
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)

我就是我,颜色不一样的烟火!!
7楼2015-09-10 16:45:20
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黎花梦香

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-10 16:30:08
我没有做过96孔的,因为觉得自己的手没那么灵巧,我做过最小是48孔的
48孔养细胞放300ul培养液,洗PBS一样300ul两次,胰酶100ul,消化时间要在显微镜下判断
既然你只需要收集细胞,胰酶处理过了点也没什么问题
...

好的,大神,非常感谢
8楼2015-09-11 09:35:01
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zai__guan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
就是普通的方法啊,PBS先洗,之后胰酶消化,离心收集或者直接吹打传代
做好自己,影响他人
9楼2015-09-11 11:35:14
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