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zc980735353铁虫 (初入文坛)
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[求助]
抗菌实验96孔板测MIC问题 已有1人参与
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| 大家好，最近我做了4种菌（MRSA 大肠 金葡 沙门），96孔板培养了18小时左右，测OD时所有的孔数据都是一样的，都没有长菌（包括空白菌液对照），（菌液稀释了10的5次方，LB培养基，）不知道是哪里出了问题？还望指导，（最好有详细的步骤）谢谢 |
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8楼2016-12-02 09:26:09
smilingworld
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2楼2015-09-09 09:51:23
zc980735353
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将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿色假单胞菌、枯草芽孢杆菌在灭菌LB培养基平板上过夜培养，挑取单菌落接种于灭菌锥形瓶的LB培养液，37℃170 r/min过夜培养。将培养后的菌液作1:1000稀释(使菌数达到105~106cfu/ml )。分别将有抑菌活性的待测拟拟肽溶液按2倍连续稀释后加入96孔微量培养板中，除第1孔加入稀释菌液90μl外，2-10各孔均加入50μl，继于第1孔加入抗菌拟肽原液(浓度1024 μg/ml ) 10μl，混合后吸出50μl加入第2孔中，依次稀释至第9孔，弃去50μL。 第10孔生长对照，第11孔LB培养液50μl空白对照，第12孔为阳性对照(庆大霉素)加90μl菌液和10μl同浓度抗生素溶液混合后弃50μl。37 ℃培养18h后，用ELISA酶标仪分别在490/520/600/620nm下对平板进行扫描 我是按照这个步骤做的，测OD值所有数据都是一样的，就是没长菌，不知道是什么问题。 |
3楼2015-09-09 15:57:14
smilingworld
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4楼2015-09-09 17:27:30
50