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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR电泳检测
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落木风声

金虫 (正式写手)

[求助] PCR电泳检测 已有5人参与

请问各位，我这个PCR过后电泳检测，怎么没有亮带，反而都是弥散带呢？

PCR电泳检测
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这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
1楼 2015-09-06 15:52:01
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-06 22:59:28
有几种可能，目的基因未扩增出来；PCR产物被污染，降解；跑电泳时电极是否插反了
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医学&统计学
2楼2015-09-06 21:07:39
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落木风声

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-09-06 21:07:39
有几种可能，目的基因未扩增出来；PCR产物被污染，降解；跑电泳时电极是否插反了

我是扩增完就将产物放在冰箱中，大概10分钟后就电泳了，估计不是产物降解，但未扩增出来的可能性较大
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这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
3楼2015-09-09 10:17:23
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w789xd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 落木风声 at 2015-09-06 15:52:01
请问各位，我这个PCR过后电泳检测，怎么没有亮带，反而都是弥散带呢？

360反馈意见截图1649122273130124.png

看一下pcr用的酶，如果用的mix，换一个试试

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4楼2015-09-09 10:38:14
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
孔边上的是啥。模板的话。你这么模板加的太多了。杂志的话。体系里加了啥。

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5楼2015-09-09 13:12:29
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落木风声

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-09 13:12:29
孔边上的是啥。模板的话。你这么模板加的太多了。杂志的话。体系里加了啥。

体系中的加的就是引物、dNTP、缓冲液、酶、模板这些东西，应该不会被污染了吧，，，模板的确加的多一些，因为侧浓度的时候，dna含量有点低。
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这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
6楼2015-09-09 21:22:09
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落木风声

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by w789xd at 2015-09-09 10:38:14
看一下pcr用的酶，如果用的mix，换一个试试
...

那个mix是什么意思？我用的是生工的热启动酶
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这世上一定存在着某些美好值得我们为之奋战到底
7楼2015-09-09 21:24:09
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兰兰园丁

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

目测最大的可能就是没有扩出来吧！

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8楼2015-09-09 21:47:13
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是没有扩增出来，只有加样孔处有一条很亮的带，可能是模板浓度太高杂质的污染造成的，可尝试稀释模板后pcr

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2015-09-09 23:10:08
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w789xd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 落木风声 at 2015-09-09 21:22:09
体系中的加的就是引物、dNTP、缓冲液、酶、模板这些东西，应该不会被污染了吧，，，模板的确加的多一些，因为侧浓度的时候，dna含量有点低。...

mix是dNTP和酶的混合成品。感觉有可能是酶的问题，拷贝数有点低。

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10楼2015-09-10 08:15:52
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