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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR目的基因
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5150416

新虫 (小有名气)

[交流] PCR目的基因

问一下大家在PCR时候有没有遇到像我这样的情况，就是怎么p就是p不出来，引物是重新换的，还是p不出来，你们将退货温度调到比设计的高多少或少多少，大家有木有好的方法，还请大家给个建议，谢谢！

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1楼 2015-09-06 15:34:06
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枭翔

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有别的非特异性条带？如果有的话，说明退火温度不合适；如果没有的话，那就不是退火温度的原因。引物看看有没有设计错误，尤其是反向引物，一般引物的质量没问题。你的模板是什么？gDNA?质粒？还是片段？PCR体系中加入5-10%的DMSO试一试。
祝试验顺利！
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11楼2015-09-07 10:39:56
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jl.liu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议使用梯度PCR设置线性梯度温度进行退火，找出最适的退火温度。还有就是你的反应体系是怎么的，也有关系，可能是引物不好，或者模板加太多了。
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2楼2015-09-07 00:32:16
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
路过的看了一下，帮顶，祝福你好运！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
3楼2015-09-07 07:25:16
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chenyuanxmc

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度:55-65，有段时间我的pcr也是怎么也p不出来，后来加大了模板浓度，才过得pcr产物，或者更换好一点的酶试试。

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4楼2015-09-07 07:51:25
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