24小时热门版块排行榜    

查看: 4090  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

[求助] 半定量RT-PCR循环数如何确定 已有2人参与

请问下做半定量RT-PCR循环数如何确定,我是这么做的,我设定的程序如下:
94度 5min
94度 30s
53度 30s
72度 30s
循环次数30次,没有最后延伸,在摸索循环数的时候,我选择了18 21 24 27 30这几个循环,然后看着pcr仪运行到18个循环时就将一管取出,21个循环时再取出一管,依此类推,请问这种做法可行吗,谢谢。如果不可行,请大家帮忙给个步骤吧,谢谢了!最好还能给出些半定量RT-PCR的步骤,谢谢了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
flll2014: 金币+1 2015-09-06 21:31:07
楼上说的没错  一定要记住最后要所以管子一起做一个加强延伸  这个过程可以在水浴锅中进行也可以在pcr仪器中进行

发自小木虫Android客户端
生命不息奋斗不止
3楼2015-09-06 00:32:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
flll2014: 金币+1, 有帮助 2015-09-06 21:31:15
这个做法可行,不过要注意以下几点
取出管子要快,马上关好PCR仪的盖子,不然里面的管子就会开始蒸干
取出后的管子马上放到冰上,并且标签好循环数
到最后一个管子要完结的时候,暂停PCR仪器,把前面收集的所有管子离心一下,全部放回去做最后延伸
好了就可以跑胶了!
2楼2015-09-06 00:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见