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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 半定量RT-PCR循环数如何确定
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flll2014

铜虫 (小有名气)

[求助] 半定量RT-PCR循环数如何确定 已有2人参与

请问下做半定量RT-PCR循环数如何确定,我是这么做的，我设定的程序如下：
94度 5min
94度 30s
53度 30s
72度 30s
循环次数30次，没有最后延伸，在摸索循环数的时候，我选择了18 21 24 27 30这几个循环，然后看着pcr仪运行到18个循环时就将一管取出，21个循环时再取出一管，依此类推，请问这种做法可行吗，谢谢。如果不可行，请大家帮忙给个步骤吧，谢谢了！最好还能给出些半定量RT-PCR的步骤，谢谢了！
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1楼 2015-09-05 21:03:36
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
flll2014: 金币+1, ★有帮助 2015-09-06 21:31:15
这个做法可行，不过要注意以下几点
取出管子要快，马上关好PCR仪的盖子，不然里面的管子就会开始蒸干
取出后的管子马上放到冰上，并且标签好循环数
到最后一个管子要完结的时候，暂停PCR仪器，把前面收集的所有管子离心一下，全部放回去做最后延伸
好了就可以跑胶了！
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2楼2015-09-06 00:03:56
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
flll2014: 金币+1 2015-09-06 21:31:07
楼上说的没错  一定要记住最后要所以管子一起做一个加强延伸  这个过程可以在水浴锅中进行也可以在pcr仪器中进行

发自小木虫Android客户端
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生命不息奋斗不止
3楼2015-09-06 00:32:57
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